摘要：試驗(yàn)旨在研究單月桂酸甘油酯(ML)對(duì)豬流行性腹瀉病毒(PEDV)感染3D4/21巨噬細(xì)胞基因表達(dá)的影響。通過ML對(duì)3D4/21細(xì)胞活力試驗(yàn)和PEDV在3D4/21細(xì)胞中的生長(zhǎng)曲線確定最適濃度和最佳時(shí)間后，將3D4/21細(xì)胞隨機(jī)分為3組(control組、PEDV組、PEDV+ML組)，各組分別以全時(shí)添加10μmol/L ML和PEDV感染細(xì)胞后添加10μmol/L ML兩種方式進(jìn)行處理，并檢測(cè)相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量。
結(jié)果表明:添加10μmol/L的ML對(duì)3D4/21細(xì)胞生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用(P<0.05)，病毒感染3D4/21細(xì)胞的48 h內(nèi)PEDV-S、M、N基因相對(duì)表達(dá)量呈現(xiàn)先增加再降低的趨勢(shì)，12 h時(shí)處于最高;與PEDV組相比，PEDV+ML組全時(shí)添加ML處理12 h使PEDV-S、M、N、IL-8、IFN-β、IFITM3基因相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，處理24 h使PEDV-S、M、N、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1和IFITM1基因相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，KCNJ13基因相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)。與PEDV組相比，PEDV+ML組在感染后添加ML處理12 h使MMP13基因相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，PEDV-M基因相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)，處理24 h使IL-6、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1、IFITM3基因相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，PEDV-S、M、N、KCNJ13基因相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)。綜上所述，PEDV感染前ML預(yù)處理具有一定的抗病毒效果;PEDV感染使細(xì)胞處于免疫應(yīng)激狀態(tài)，ML有一定的緩解作用。
引言
豬流行性腹瀉病毒（porcine epidemic diarrhea vi?rus，PEDV）是一種冠狀病毒，它可感染各個(gè)階段的豬，尤其對(duì)哺乳仔豬的危害最大，死亡率可高達(dá)90%，給全球養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的損失。在感染初期，被感染豬會(huì)出現(xiàn)食欲不振，精神萎靡，嘔吐等癥狀，到了感染后期，被感染豬會(huì)出現(xiàn)黃色或深黃色的水樣腹瀉、脫水，甚至死亡。PEDV主要是通過口和鼻入侵消化系統(tǒng)，可以駐留在腸道隨后破壞小腸黏膜的免疫屏障，最終導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)一系列癥狀，甚至死亡。根據(jù)Lee等報(bào)道的免疫組織化學(xué)（IHC）結(jié)果，腸絨毛細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和浸入固有層的巨噬細(xì)胞中都檢測(cè)到了PEDV抗原。Park等發(fā)現(xiàn)，適應(yīng)Vero細(xì)胞的PEDV在原代豬肺泡巨噬細(xì)胞和連續(xù)傳代的豬肺泡巨噬細(xì)胞中都可以復(fù)制。這說明PEDV在肺泡巨噬細(xì)胞中也可復(fù)制滯留，然而肺泡巨噬細(xì)胞的低效感染很容易被忽視，這也可能是養(yǎng)豬場(chǎng)存在PEDV持續(xù)感染的原因。
單月桂酸甘油酯（glycerol monolaurate，ML）屬于一種中鏈脂肪酸，又名十二酸單甘油酯，能夠從母乳、椰子油和美洲蒲葵中提取出來，也可由月桂酸（又稱十二烷酸）和甘油酯合成。ML具有親水基團(tuán)和易溶于生物膜的疏水基團(tuán)，能夠與生物膜結(jié)合，對(duì)脂質(zhì)雙層膜產(chǎn)生一系列的影響。研究表明，ML有很強(qiáng)的抗病毒能力，對(duì)皰疹病毒等包膜類的病毒有明顯抑制效果，這或許與其能和病毒膜產(chǎn)生相互作用有關(guān)；Isaacs等發(fā)現(xiàn)，在牛奶配方中添加鏈長(zhǎng)為8~12碳的脂肪酸和單甘油酯比長(zhǎng)鏈脂肪酸單甘油酯具有更強(qiáng)的抗病毒和抗菌性；給攜帶藍(lán)耳病病毒的母豬飼喂含ML的日糧，能夠有效改善母豬健康，且未檢測(cè)到仔豬帶毒。同時(shí)有研究將中鏈脂肪酸(包括月桂酸)及其甘油單酯加入乳制品中，發(fā)現(xiàn)ML對(duì)流感病毒、泡狀口腔炎病毒、口腔炎病毒及呼吸系統(tǒng)多核體病毒的增殖具有顯著的抑制作用。
試驗(yàn)通過體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，嘗試建立PEDV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞（3D4/21）模型，首先探究ML對(duì)3D4/21細(xì)胞活力的影響，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探究其是否具有抗PEDV感染的作用，并初步探討抗病毒機(jī)制。
十二酸單甘油酯對(duì)PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（一）
十二酸單甘油酯對(duì)PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（二）
十二酸單甘油酯對(duì)PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（三）
十二酸單甘油酯對(duì)PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（四）
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