2結(jié)果與分析
2.1 ML對3D4/21細(xì)胞活性的影響
由表5可知，與control組相比，10μmol/L的ML組細(xì)胞存活率最高（P<0.05）；而50μmol/L的ML組細(xì)胞存活率顯著降低（P<0.05）。
表5不同水平ML對3D4/21細(xì)胞活性的影響
注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)含有不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05），含有相同小寫字母或無字母表示差異不顯著（P>0.05）。
2.2 PEDV在3D4/21細(xì)胞中的生長曲線
由圖1可知，PEDV-S、M、N基因的mRNA水平隨著感染時(shí)間的不同有一定的變化。具體表現(xiàn)為，在病毒感染3D4/21細(xì)胞的48 h內(nèi)，病毒基因的相對表達(dá)量呈現(xiàn)先增加再降低的趨勢，其中病毒感染12 h時(shí)，病毒基因的相對表達(dá)水平最高。
圖1 PEDV適應(yīng)3D4/21細(xì)胞的病毒生成曲線
2.3 ML對PEDV感染3D4/21細(xì)胞基因相對表達(dá)量的影響
由表6可知，與PEDV組相比，PEDV+ML組全時(shí)添加ML使PEDV-S、M、N基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05）。與control組相比，PEDV組全時(shí)添加ML處理12 h使IFN-β、IFITM3基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)，IL-6基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)；處理24 h使IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。與PEDV組相比，PEDV+ML組全時(shí)添加ML處理12 h使IL-8、IFN-β、IFITM3基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05），處理24 h使IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1和IFITM1基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05），KCNJ13基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。
表6全時(shí)添加ML對PEDV感染3D4/21細(xì)胞基因相對表達(dá)量的影響（處理方式1）
注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)含有不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05），含有相同小寫字母或無字母表示差異不顯著（P>0.05）；下表同。
由表7可知，與PEDV組相比，PEDV+ML組在感染后添加ML處理12 h使PEDV-M基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05），處理24 h使PEDV-S、M、N基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。與control組相比，PEDV組在感染后添加ML處理12 h使IL-8、IFITM3、MMP13基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05），處理24 h使IL-6、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1、IFITM3基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。與PEDV組相比，PEDV+ML組在感染后添加ML處理12 h使MMP13基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05），處理24 h使IL-6、IL-8、IFN-β、MX1、ISG15、IFIT1、IFITM1、IFITM3基因的相對表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05），KCNJ13基因的相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。
表7感染后添加ML對PEDV感染3D4/21細(xì)胞基因相對表達(dá)量的影響（處理方式2）
3討論
3.1 ML對3D4/21細(xì)胞活性的影響
ML屬于一種中鏈脂肪酸，能為機(jī)體提供能量。有研究表明，ML有助于改善動物生長或生產(chǎn)性能及腸道健康，亦可預(yù)防和治療疾病。ML作為脂肪酸甘油酯，在仔豬腸道未發(fā)育完全時(shí)能直接結(jié)合腸上皮細(xì)胞，對仔豬生長產(chǎn)生有益作用；Lee等研究發(fā)現(xiàn)，給新生仔豬直接灌服中鏈脂肪酸酯能夠提升存活率。本試驗(yàn)中，細(xì)胞培養(yǎng)基液中加入ML可以促進(jìn)細(xì)胞巨噬細(xì)胞的增殖，這與上述結(jié)果一致，可能是通過給細(xì)胞提供能量來促進(jìn)豬肺泡巨噬細(xì)胞的增殖分化。且本試驗(yàn)中，10μmol/L的ML可以顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖，效果好于其他濃度處理。
3.2 PEDV在3D4/21細(xì)胞的生成曲線
PEDV感染的主要癥狀為腹瀉和嘔吐，基于此癥狀，研究人員普遍認(rèn)為它感染的靶細(xì)胞是腸上皮細(xì)胞（IPEC）。然而近年來，對于PEDV的研究也有了很多新的發(fā)現(xiàn)，通過免疫組化等技術(shù)發(fā)現(xiàn)，PEDV感染的仔豬肺臟有病毒感染和復(fù)制。本試驗(yàn)中，在PEDV感染3D4/21細(xì)胞的48 h內(nèi)，病毒基因的相對表達(dá)量呈現(xiàn)先增加再降低的趨勢，其中12 h病毒基因相對表達(dá)量最高，且PEDV-N基因的相對表達(dá)量變化幅度最大，這可能是PEDV-N基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量最高的原因，因此N基因也被應(yīng)用于感染的早期診斷?？偟膩碚f，本試驗(yàn)證明PEDV可以感染3D4/21細(xì)胞并能夠在該細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。
十二酸單甘油酯對PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（一）
十二酸單甘油酯對PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（二）
十二酸單甘油酯對PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（三）
十二酸單甘油酯對PEDV感染3D4/21巨噬細(xì)胞活性、基因表達(dá)的影響（四）