本研究通過初篩、復(fù)篩從青島近海沉積物中分離出一株具有瓊膠酶活性的菌株，該菌的最佳發(fā)酵時間為26 h，對該菌培養(yǎng)基進(jìn)行盧戈氏碘液染色后菌落周圍出現(xiàn)明顯透明圈，鏡檢觀察菌株的革蘭氏染色結(jié)果表明，該菌為革蘭氏陰性菌。經(jīng)過鑒定，該菌株為不動桿菌(Acinetobactersp.)，命名為Acinetobactersp.LXK，對該菌的粗酶學(xué)特性進(jìn)行初步研究，結(jié)果顯示，該酶的最適反應(yīng)溫度為40℃，最適底物濃度為0.5%，最適反應(yīng)體系pH為8.0，K+和Ca2+對酶解反應(yīng)有促進(jìn)作用，F(xiàn)e2+、Mn2+和Ba2+對酶解反應(yīng)有不同程度的抑制作用。
海洋多糖工業(yè)的興起使得海洋多糖及其降解酶受到了廣泛的重視?，F(xiàn)如今，備受矚目的瓊膠寡糖有著分子量小、水溶性好、易吸收等特點(diǎn)，使其抗病消炎、抗淀粉老化、保濕美白等功效的應(yīng)用價值大幅提升，已經(jīng)廣泛應(yīng)用在食品、化妝品和醫(yī)療等領(lǐng)域。但是，利用瓊膠酶降解瓊膠規(guī)模性生產(chǎn)瓊膠寡糖在世界范圍內(nèi)是個研究的難點(diǎn)，原因就在于缺少工程菌和瓊膠酶產(chǎn)生菌的產(chǎn)酶活力低等問題。我國雖然是一個海洋大國，海洋資源雄厚，但生產(chǎn)的多為初級產(chǎn)品，在瓊膠及瓊寡糖的研發(fā)與應(yīng)用領(lǐng)域尚處于起步階段。瓊膠，也叫瓊脂，是從石花菜、江蘺等紅藻植物中提取出一類藻膠，由瓊脂糖(agarose)和瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由1，3連結(jié)的β-D-半乳糖和1，4連結(jié)的3，6-內(nèi)醚-L-半乳糖交替連接起來的長鏈分子;瓊脂膠由包含硫酸基、甲基等多種取代基的復(fù)雜單糖殘基多糖鏈構(gòu)成。目前，降解瓊膠生產(chǎn)瓊寡糖較常用的方法有兩種，一個是化學(xué)法，另一個是酶解法?；瘜W(xué)降解法存在反應(yīng)條件難以控制、產(chǎn)品分析和產(chǎn)物回收難等弊端。酶解法降解瓊膠因特異性強(qiáng)、反應(yīng)條件溫和、降解過程簡單易控等優(yōu)點(diǎn)使其成為生產(chǎn)瓊寡糖的主要手段。
從19世紀(jì)50年代開始，人們陸續(xù)分離出多種瓊膠降解菌，包括芽孢桿菌屬（Bacillus sp.）、鹽桿菌屬（Salegentibacter sp.）、假單孢菌屬（Pseudomonas sp.）、寡養(yǎng)單胞菌屬（Stenotrophomonas sp.）、噬瓊膠菌屬（Agarivorans sp.）、短桿菌屬（Brevibacterium sp.）、弧菌屬（Vibrio sp.）、黃桿菌屬（Flavobacterium sp.）、假交替單孢菌屬（Alteromonas sp.）和不動桿菌屬（Acinetobacter sp.）等。海洋是瓊膠酶產(chǎn)生菌生存的大環(huán)境，較容易分離出瓊膠降解菌。例如，劉麗莉和蔡俊鵬等人分別在海藻中分離出產(chǎn)瓊膠酶菌株Vibrio agarivorans ZGR-26和Aeromonas trota JK333；郭彥岑等人在海洋沉積物中分離出產(chǎn)瓊膠酶菌株Vibrio sp.FG2；馬悅欣等人在仿刺參消化道內(nèi)分離出產(chǎn)瓊膠酶菌株P(guān)seudoalteromonas sp.HF3-04；杜宗軍和褚艷等人分別在海水中分離出產(chǎn)瓊膠酶菌株Alteromonas addita QM65和Pseudomonas sp.CY-24。但是，由于瓊膠酶活性低等問題，目前還沒有工業(yè)化的菌株。進(jìn)一步尋找產(chǎn)瓊膠酶的菌株是酶法制備瓊寡糖的迫切需要。本研究從青島近海沉積物中分離具有瓊膠酶活性的菌株，對其進(jìn)行鑒定和粗酶學(xué)特性的初步研究，以期獲得適合工業(yè)應(yīng)用的瓊膠酶。
1材料與方法
1.1材料與儀器
瓊脂粉、酵母粉、蛋白胨北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠；NaCl、MgSO4、KCl天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；CaCl2、K2HPO4、乙醇天津市巴斯夫化工有限公司；FeSO4萊陽市康德化工有限公司；沙皇染液、結(jié)晶紫染液北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。
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