本文擬通過心肌細(xì)胞系的體外培養(yǎng)，繪制生長(zhǎng)曲線，初步探討在高原體外培養(yǎng)動(dòng)物心肌細(xì)胞的可行性和細(xì)胞的生長(zhǎng)特性，為高原病研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
細(xì)胞計(jì)數(shù)和生長(zhǎng)曲線法檢測(cè)細(xì)胞增殖
細(xì)胞接種當(dāng)天計(jì)為0d，在培養(yǎng)的1-15d間每天下午16點(diǎn)取3塊平皿的細(xì)胞用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
使用CCK8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105后接種于96孔板，每孔加入100μL單細(xì)胞懸液，分別在培養(yǎng)的1-15d間，每天取5個(gè)孔檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)每孔加入10μLCCK8溶液，細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1h，用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定吸光度。
細(xì)胞增殖能力
在心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)，采用CCK8法繪制生長(zhǎng)曲線(見圖)，從圖中可見0-1d天內(nèi)曲線呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，1-7d曲線平緩上升，7-11d曲線急劇上升，11d后曲線逐漸變得平直且有下降趨勢(shì)。
圖高原環(huán)境體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
表1不同時(shí)間點(diǎn)培養(yǎng)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞細(xì)胞數(shù)(xˉ±s)
心肌細(xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，數(shù)量不斷增加，在第5d時(shí)細(xì)胞數(shù)較第1d時(shí)增加了3倍，第7d時(shí)細(xì)胞再次倍增之后細(xì)胞進(jìn)入快速生長(zhǎng)時(shí)期到第11d時(shí)細(xì)胞數(shù)達(dá)到頂峰，以后進(jìn)入平臺(tái)期（見表1）。
討論
目前我國(guó)對(duì)高原病細(xì)胞水平的研究主要側(cè)重于非高原地區(qū)模擬低氧條件的研究[1]。模擬的低氧條件與高原現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境有很大的差異，例如缺氧持續(xù)的時(shí)間、全天內(nèi)不同時(shí)段氧分壓的細(xì)微改變、不同季節(jié)氧分壓的變化以及溫度、濕度等情況都是難以模擬的，所以在高原現(xiàn)場(chǎng)開展細(xì)胞水平、分子水平的研究對(duì)深入探討高原病的發(fā)病和病理機(jī)制較模擬條件下研究更有意義且更加有助于對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)。
本研究在西藏大學(xué)高原醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心完成。采用單一樣本觀察的方法對(duì)高原環(huán)境體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞生長(zhǎng)特性進(jìn)行研究。一般來(lái)講體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過程分為潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期三個(gè)階段,本研究中結(jié)果顯示，心肌細(xì)胞在高原條件下的生長(zhǎng)曲線也分為三個(gè)階段，第一階段為潛伏期，該時(shí)間段正是細(xì)胞處在損傷修復(fù)、環(huán)境適應(yīng)和貼壁等過程，所以“生長(zhǎng)曲線”從初接種的0d時(shí)有下降表現(xiàn)，1d時(shí)“生長(zhǎng)曲線”趨于平緩，2d時(shí)“生長(zhǎng)曲線”有上升趨勢(shì)；從第3d起可見曲線逐步上升說明細(xì)胞進(jìn)入了快速生長(zhǎng)期即第二階段對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在這一階段細(xì)胞活力旺盛、增殖活躍、數(shù)量倍增明顯；隨著時(shí)間的進(jìn)一步推移從第11d開始曲線逐漸變得平直且有下降趨勢(shì)即進(jìn)入第三階段平臺(tái)期，這一階段細(xì)胞數(shù)量基本維持在恒定水平。從以上三個(gè)階段可以看出高原現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)較以往文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]的非高原環(huán)境培養(yǎng)細(xì)胞所需的時(shí)間長(zhǎng)且細(xì)胞生長(zhǎng)的各個(gè)時(shí)段也較非高原地區(qū)要長(zhǎng)[4-5]，推斷這一現(xiàn)象可能與高原低壓低氧有關(guān)。
相關(guān)新聞推薦
1、首次明確中慢生根瘤菌屬及其近源屬的屬級(jí)分類基因閾值
2、銅綠假單胞菌Pa021的分離及鑒定、一步生長(zhǎng)曲線、殺菌曲線繪制
3、不同來(lái)源桑黃菌株生長(zhǎng)特性及拮抗試驗(yàn)分析
4、O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌菌落形態(tài)、致病能力、生長(zhǎng)曲線的影響（一）