桑黃，又名鮑氏層孔菌Phellinusigniarius，是目前發(fā)現(xiàn)的生物抗癌領(lǐng)域有效率最高的大型真菌。目前在桑黃的研究與開發(fā)中，頻頻出現(xiàn)“同物異名”、“同名異物”的現(xiàn)象，在文獻中和已經(jīng)作為產(chǎn)品提供的鑒定標(biāo)本中當(dāng)作“桑黃”使用的種有12個，造成了名稱和應(yīng)用上的混亂。針對這一現(xiàn)象，本研究對收集到的8種不同來源的桑黃菌株進行了菌絲體生長特性的研究，旨在對其親緣關(guān)系遠近進行初步鑒定，為今后對桑黃的研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
1 供試材料
表1 供試菌株編號及來源
1.1 供試菌種
均由陜西科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院微生物菌種室提供，菌種編號及來源如表1所示。
1.2 供試培養(yǎng)基
斜面培養(yǎng)基、平板培養(yǎng)基均為綜合PDA培養(yǎng)基。
2 試驗方法
2.1 培養(yǎng)基的制備
參照參考文獻進行。
2.2 菌種的培養(yǎng)
2.2.1 菌種純化
按照無菌操作的要求，取一塊菌種轉(zhuǎn)接于平板培養(yǎng)基中央，置28 ℃恒溫培養(yǎng)。待菌絲生長3——6 d，取菌落邊緣純凈的一小塊菌塊轉(zhuǎn)接到斜面試管中培養(yǎng)。如此反復(fù)幾次，可使菌種達到純化及活化的效果，滿管后于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?
2.2.2 菌種擴培
按照上述方法進行試管轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，待菌絲長滿后放4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?
2.2.3 培養(yǎng)觀察
將活化好的菌種按無菌操作的要求分別轉(zhuǎn)接至斜面和平板培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)，每2 d觀察1次，記錄菌絲萌發(fā)快慢、生長速度、菌落大小、菌絲顏色、長勢等特征（每組做6個平行取均值）。
平板菌絲長速（mm/d）=菌落半徑（mm）/菌絲生長天數(shù)（d）斜面菌絲長速（mm/d）=菌絲長度（mm）/菌絲生長天數(shù)（d）
2.2.4 拮抗試驗
按照無菌操作的要求，將活化好的8種桑黃菌點接于平板培養(yǎng)基上，每個平板均勻接入3種菌株，每組合3個平行，28 ℃恒溫培養(yǎng)7——10 d，觀察菌絲間是否有拮抗現(xiàn)象發(fā)生，拮抗線是否明顯，并拍照記錄。根據(jù)拮抗線的寬度、顏色等特征，可以鑒別菌株的差異大小。
3 結(jié)果與討論
3.1 菌絲生長特性比較
圖1 斜面和平皿培養(yǎng)基菌絲形態(tài)示例
表2 不同菌絲生長特性比較
注：+++菌絲生長勢強，++菌絲生長勢一般，+菌絲生長勢弱。
由圖1和表2可以看出，8個菌株中，R、H、S7的長勢最好，其次為S、S6和S8.長勢較好的菌株日平均生長速度較快，長勢弱的菌株生長速度較慢。不同菌株的菌落形態(tài)及菌絲顏色也有差異，H、W、S8、S1的菌絲顏色較深，且易產(chǎn)生色素，S7和S菌絲生長到后期表面會有油狀分泌物出現(xiàn)，這些特征均是伴隨菌齡的增加而產(chǎn)生的。
通過對菌絲生長過程的觀察，菌絲生長速度呈現(xiàn)先慢后快而后又慢的趨勢。這是由于新接入的桑黃菌株對新環(huán)境有一個適應(yīng)過程，所以生長比較緩慢；當(dāng)接種5 d左右的時候，新接入的桑黃菌株已適應(yīng)新的生長環(huán)境，這時由于環(huán)境中營養(yǎng)成分充足，所以桑黃菌種開始在培養(yǎng)基上迅速生長，進入快速生長階段；當(dāng)培養(yǎng)到后期的時候，由于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)及氧供給的限制，菌絲的生長速度變慢，有些菌絲進入老化階段。
圖2 拮抗試驗示例
3.2 拮抗試驗結(jié)果與分析
表3 拮抗實驗結(jié)果分析
注：+拮抗現(xiàn)象不顯著，++拮抗現(xiàn)象顯著，+++拮抗現(xiàn)象非常顯著。
通過圖2和表3可以看出，S1與W；S6與R；S7與S8；H與S之間拮抗線不明顯，說明它們之間的親緣性較近；而S6與H、W、S；S7與H、S；S8與H；R與W、S；H與W；W與S之間拮抗線明顯，親緣性較遠。
4 結(jié)束語
本試驗從形態(tài)培養(yǎng)觀察和拮抗試驗分析兩個方面對8種不同來源的桑黃菌株進行了比較，初步得出其親緣關(guān)系的遠近，為以后的試驗和研究奠定了基礎(chǔ)。但由于此方法易受環(huán)境條件等因素的影響，應(yīng)用于桑黃的種性鑒定中還存在缺陷，因此在后續(xù)的研究工作中還需對其做進一步的研究與分析。
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