間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stromal/stem cell，MSC)，是一類存在于多種組織(如骨髓、臍帶血、臍帶組織、胎盤組織和脂肪組織等)，具有多向分化潛能，非造血干細胞的成體干細胞。這類干細胞具有向多種間充質(zhì)系列細胞(如成骨、成軟骨及成脂肪細胞等)或非間充質(zhì)系列的細胞分化潛能，并具有獨特的細胞因子分泌功能。
間充質(zhì)干細胞的多能性(Multipotent)是指具有形成機體內(nèi)超過一種類型細胞的能力，在體外可誘導(dǎo)分化為骨和脂肪等多種功能細胞，并能表達調(diào)控細胞向其他組織細胞類型或器官分化的基因特性(如SSEA-4、OCT-4、SOX-2和NANOG基因均為多能性基因)。間充質(zhì)干細胞是以細胞分裂的方式產(chǎn)生新細胞的特性，包括細胞周期中各不同階段所占比例以及細胞分裂過程中細胞數(shù)量隨時間變化的特征。需要對臍帶間充質(zhì)干細胞hUC-MSCs存活率、直徑和生長曲線進行檢測，以把控間充質(zhì)干細胞的質(zhì)量要求。
圖為臍帶間充質(zhì)干細胞的細胞生長曲線。
一種臍帶間充質(zhì)干細胞存活率、直徑和生長曲線的檢測方法，包括以下步驟：
1)將臍帶間充質(zhì)干細胞接種于細胞培養(yǎng)板中，在37℃和體積濃度為5％CO2
下進行培養(yǎng)，收集細胞；
所述臍帶間充質(zhì)干細胞的接種密度為1×105細胞/ml；
2)將所述步驟1)得到的細胞制成細胞懸液，將所述細胞懸液在細胞活力分析儀上分析細胞存活率、直徑和生長曲線；
所述細胞懸液的濃度為5×105～1×107細胞/ml。
臍帶間充質(zhì)干細胞的代數(shù)為2～6代。
細胞培養(yǎng)板為6孔細胞培養(yǎng)板。
培養(yǎng)的時間為10h。
培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基包括無血清培養(yǎng)基，每孔添加量為2ml。
收集細胞的方法包括：在4℃、1200rpm下離心6min。
使用PBS緩沖液制備細胞懸液，所述PBS緩沖液的組分為NaCl8g/L、Na2HPO4·12H2O 2.9g/L、KCl 0.2g/L和KH2、PO4 0.2g/L。
優(yōu)選的，每間隔12h分析1次。
檢測的機理為：通常認為細胞膜喪失完整性即細胞死亡。有完整細胞膜的活性細胞能夠抵御臺盼藍；而喪失細胞膜完整性的細胞通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。細胞活力分析儀通過成像系統(tǒng)色調(diào)的對比實現(xiàn)對細胞存活率的精確分析。
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