2結(jié)果和分析
2.1霉菌毒素降解菌的富集培養(yǎng)結(jié)果
圖1不同深度豬糞溶液涂布接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的細(xì)菌生長(zhǎng)結(jié)果
本實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)是獲得能同時(shí)降解主要霉菌毒素的芽孢桿菌。為了減少非芽孢菌的影響，本實(shí)驗(yàn)將豬糞稀釋液加熱后用于培養(yǎng)。盡管如此，豬糞溶液在不高于1:1 000稀釋時(shí)，涂布接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上后，仍可長(zhǎng)出大量菌落（見圖1）。說(shuō)明豬糞中的芽孢桿菌數(shù)量非常多，這在理論上為篩選出對(duì)嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素B1能同時(shí)降解的芽孢桿菌提供了可能性。為了進(jìn)一步減少非芽孢菌對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響，本實(shí)驗(yàn)對(duì)豬糞初次分離菌再一次加熱后才用于富集培養(yǎng)。
本實(shí)驗(yàn)的富集培養(yǎng)進(jìn)行了3次，每次培養(yǎng)時(shí)間為1周。采用較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間和反復(fù)富集培養(yǎng)有利于提高最終菌液中霉菌毒素降解菌的比例。
2.2霉菌毒素降解菌定向篩選的結(jié)果
本實(shí)驗(yàn)先用嘔吐毒素進(jìn)行定向篩選，結(jié)果獲得10株對(duì)嘔吐毒素降解率達(dá)70%以上的菌株，分別命名為ODS-1、ODS-2、ODS-3、ODS-4、ODS-5、ODS-6、ODS-7、ODS-8、ODS-9和ODS-10（見表1）。再用玉米赤霉烯酮對(duì)這10株細(xì)菌進(jìn)行定向篩選，結(jié)果ODS-1、ODS-2、ODS-5和ODS-8對(duì)玉米赤霉烯酮的降解率也達(dá)到70%以上（見表2）。最后用黃曲霉毒素B1對(duì)ODS-1、ODS-2、ODS-5和ODS-8進(jìn)行定向篩選，結(jié)果只有ODS-1對(duì)黃曲霉毒素B1的降解率達(dá)70%以上（見表3）。因此，本實(shí)驗(yàn)中篩選到的ODS-1對(duì)這3種霉菌毒素均有較好的降解率，是本研究的目標(biāo)細(xì)菌。
2.3目標(biāo)細(xì)菌的形態(tài)觀察
ODS-1菌株在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)時(shí)間較短時(shí)即可長(zhǎng)成灰白色、半透明、圓形、表面光滑的菌落，培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)菌落表面可皺縮（見圖2）。革蘭氏染色鏡檢結(jié)果表明ODS-1菌株為革蘭氏陰性桿菌（見圖3）。
3討論
圖2 ODS-1在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)時(shí)的菌落形態(tài)
圖3 ODS-1細(xì)菌形態(tài)。A:革蘭氏染色；B:美蘭染色。
霉菌毒素對(duì)畜牧業(yè)和人類健康都有極大的危害。飼料中霉菌毒素的污染是一個(gè)普遍現(xiàn)象。雖然物理吸附是當(dāng)前控制飼料霉菌毒素污染的主要途徑，但物理吸附劑常常只對(duì)某一種霉菌毒素有較強(qiáng)選擇性，對(duì)其他種類的霉菌毒素選擇性不強(qiáng)，并且物理吸附劑還易導(dǎo)致對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的吸附，從而可能影響營(yíng)養(yǎng)素的吸收。霉菌毒素的生物降解技術(shù)具有安全性高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)而被人們寄于厚望。以往的研究大多僅側(cè)重于篩選對(duì)某一種霉菌毒素有降解作用的細(xì)菌。由于飼料中污染的霉菌毒素種類繁多，特別是黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮是最常見的霉菌毒素。所以，篩選能對(duì)這3種霉菌毒素都具有較好降解作用的細(xì)菌非常重要，有利于降低生產(chǎn)成本。許多研究表明，一些細(xì)菌對(duì)霉菌毒素的降解具有多能性，即能同時(shí)降解不同結(jié)構(gòu)類型的霉菌毒素。例如，牛天貴等就篩選獲得一株對(duì)黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素都具有較好降解作用的芽孢桿菌。徐劍宏等則篩選到一株不產(chǎn)芽孢的德沃氏菌，該菌對(duì)飼料中嘔吐毒素、黃曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的降解率分別達(dá)到95.3%、92.4%和75.6%。本研究中篩選到的ODS-1菌株對(duì)嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素B1的降解率也分別達(dá)到96.2%、94.6%和78.9%，這為將其開發(fā)成霉菌毒素降解菌劑奠定了基礎(chǔ)。
和非芽孢菌相比，芽孢桿菌具有優(yōu)良的抗逆性，能耐受飼料制料和貯存過(guò)程中的不利生存條件。因此，芽孢桿菌更有利于在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用。同時(shí)，芽孢桿菌也常常是優(yōu)良的益生菌，在畜禽的腸道中可以分泌消化酶，拮抗病原菌的生長(zhǎng)。本研究從母豬糞便中篩選到一株對(duì)飼料中污染的主要霉菌毒素（嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素B1）均有較好降解作用的芽孢桿菌，為開發(fā)具有霉菌毒素降解功能的新型產(chǎn)酶益生素提供了新思路。對(duì)于ODS-1菌株的確切鑒定還需進(jìn)一步研究。
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