櫻桃有較早的成熟期,素來有“春果第一枝”的美譽(yù),食用價(jià)值高、經(jīng)濟(jì)效益好。但在櫻桃樹生長過程中經(jīng)常會(huì)遭到一些病蟲害的影響,其中櫻桃流膠病就是櫻桃種植中常見的病害之一。櫻桃流膠病會(huì)危害枝干,造成主干、主枝甚至枝條流膠,導(dǎo)致樹勢衰弱,樹體抵抗力降低,果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)下降,嚴(yán)重時(shí)大枝枯死,甚至整株死亡。意大利、智利等地均有發(fā)生。隨著櫻桃栽培面積的擴(kuò)大,流膠病的發(fā)生也不斷呈上升趨勢,探明櫻桃流膠病的病因以及尋求流膠病的防治方法對促進(jìn)櫻桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有十分重要的意義。
目前國內(nèi)外對櫻桃流膠病的研究多側(cè)重于研究流膠的規(guī)律和其他相似核果類的致病菌。Bush、Copes、羅春香和Saniewski等多側(cè)重于研究流膠的爆發(fā)期及外部因素的影響。吳文能等、Koh等、Tang等和吳小芹等等發(fā)現(xiàn)Botryosphaeriadothidea是獼猴桃采后果實(shí)腐爛病、蘋果輪紋病及一些經(jīng)濟(jì)林、用材林、綠化林木和較為珍稀樹種潰瘍的主要致病菌。但并未對造成甜櫻桃流膠的主要致病菌及侵染機(jī)理進(jìn)行詳細(xì)的研究。Griffin等是最早研究櫻桃流膠病的,但并未分離到引起櫻桃流膠的關(guān)鍵致病菌。張福興等證實(shí)了甜櫻桃潰瘍型流膠病的致病菌屬為Botryosphaeria,但僅對此致病菌屬的致病性進(jìn)行了簡單描述,并未對其生物學(xué)特性進(jìn)行系統(tǒng)化研究。因此,本實(shí)驗(yàn)在已成功分離純化并通過回接驗(yàn)證一株能引起甜櫻桃流膠的病原菌SXYTLJ01的基礎(chǔ)上,對該菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行了更深入的探索。
本實(shí)驗(yàn)以在山西榆次櫻桃園中甜櫻桃流膠病枝上分離得到的病原菌SXYTLJ01為對象,通過觀察其菌絲結(jié)構(gòu),不同脅迫條件下能否誘導(dǎo)產(chǎn)孢,其最適生長條件和致死溫度等方面,對該菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,以期為該菌種建檔提供有用信息,為明確病害的發(fā)病機(jī)理及防治提供試驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料與儀器
病原菌SXYTLJ01菌株從山西榆次櫻桃園的流膠枝條上分離純化得到;菌株保存在4℃的冰箱中,備用,在試驗(yàn)前轉(zhuǎn)接馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基配方:馬鈴薯20%,葡萄糖2%,硫酸鎂0.2%,無水磷酸二氫鉀0.2%,蛋白胨0.3%,瓊脂2%),28℃暗培養(yǎng),活化得到試驗(yàn)用菌落。瓊脂北京索萊寶科技有限公司;葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、乳糖、蔗糖天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;蛋白胨、牛肉膏、硫酸銨、硝酸鈉、硝酸鉀北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;硫酸鎂天津市北辰方正試劑廠;無水磷酸二氫鉀北京精求化工廠;乳酸石炭酚棉蘭染色液北京索萊寶科技有限公司;Ezup柱式SK8259真菌基因組DNA抽提試劑盒、Taq Plus DNA聚合酶、10X PCR Buffer(含Mg2+)、dNTP(10 mmol/L)、滅菌去離子水、6×DNA Loading Dye、DNA Ladder Mix(100～10000 bp)、DNA Ladder Mix(100～3000 bp)、50×TAE、瓊脂糖H、SanPrep柱式PCR產(chǎn)物純化試劑盒、異丙醇、1×TE生工生物工程(上海)股份有限公司;無水乙醇天津歐博凱化工有限公司。
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