三、傾注平板法
1.定義：
待分離微生物樣品經(jīng)過一系列梯度（一般10倍遞增）稀釋后，使微生物菌體充分分散，成為單細胞，然后再取出一定量稀釋液和固體培養(yǎng)基混勻，傾注到固體培養(yǎng)基的方法，再經(jīng)過適宜的培養(yǎng)條件，形成單菌落的過程。
2.目的：
獲得純培養(yǎng)在微生物雜菌中的數(shù)量或比例—平板計數(shù)。
3.操作步驟：
梯度稀釋步驟：同平板涂布法。
傾注平板步驟：
(1)制備培養(yǎng)基：準備固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿，高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后固體培養(yǎng)基放置于水浴鍋中備用。
(2)標記：將事先制備好的無菌平板上標記10-7、10-8、10-9，每一個梯度稀釋設置三個重復。
(3)傾注：將固體培養(yǎng)基冷卻至適合溫度后，用無菌移液器吸取10-7稀釋液0.1mL放入固體培養(yǎng)基中混勻，然后倒入編號10-7的3個培養(yǎng)皿中，或者用無菌移液器吸取10-7稀釋液0.1mL放入編號10-7的3個平板中，倒固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿中混勻。
(4)繼續(xù)傾注：同樣傾注10-8稀釋液和10-9稀釋液。
(5)培養(yǎng)：將傾注好的平板平放于超凈臺上靜置，待凝固后，將平板放置于恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。
(6)計數(shù)：待長出單菌落后即可計數(shù)。
菌落計數(shù)：同平板稀釋法。
4.操作技巧：
(1)固體培養(yǎng)基溫度不宜過高，過高會燙死微生物；溫度也不能太低，容易凝固結(jié)塊，無法和稀釋液混勻。如何確定合適的溫度？
用手心手背觸摸培養(yǎng)基，手心不燙手背燙的溫度，基本就是50℃左右（不同人溫度敏感性有一定差異）。
根據(jù)不同目標菌種，確定合適的溫度，但一定要考慮固體培養(yǎng)基凝固的溫度，一般40℃左右凝固。
(2)培養(yǎng)基和稀釋液混勻過程中，沿壁搖勻，以免產(chǎn)生起泡，影響觀察和美觀。
沿壁搖勻，能夠保證培養(yǎng)基和稀釋液充分混合，也不會產(chǎn)生氣泡，切勿猛烈搖晃，氣泡太多，制成的平板無法計數(shù)。
(3)梯度稀釋過程，一般用試管，試管長度要適宜，不宜過長，不方便操作，也不宜過短，無法搖勻或容易溢出。
(4)為了操作方便，可以采用離心管代替試管進行梯度稀釋，上下顛倒，容易混勻。
(5)實驗過程中用到的無菌水是無菌生理鹽水，保護細胞。
5.注意事項：
(1)整個過程，需要在無菌環(huán)境下進行。
(2)固體培養(yǎng)基放置在水浴鍋中，也要經(jīng)常搖動，不能靜置。
(3)如果發(fā)現(xiàn)平板上水太多，處理后再使用。
(4)切記寫清楚標記。
(5)試驗完畢，注意灼燒涂布器，以免影響環(huán)境，造成交叉污染。
四、平板涂布法和傾注平板法的區(qū)別和聯(lián)系
1.第一步都是先梯度稀釋樣品，稀釋好后，分離方式不同。
平板涂布法是將不同梯度的稀釋液分別取少量，加入不同的固體培養(yǎng)基上，然后用涂布棒在平板表面涂布均勻。
傾注平板法是將不同梯度的稀釋液分別取少量，和融化好的培養(yǎng)基混勻后倒入培養(yǎng)皿中。
2.固體培養(yǎng)基的處理方式不同
平板涂布法是將固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿滅菌后，培養(yǎng)基冷卻至合適溫度再倒平板，平板凝固后才可以使用，要么無法涂布。
傾注平板法是將固體培養(yǎng)基滅好后，放置在恒溫水浴鍋中，一直等到備好不同梯度稀釋液后，固體培養(yǎng)基冷卻至適合溫度跟不同梯度稀釋液混勻，然后倒入干凈的培養(yǎng)皿中。
傾注平板法為了涂布均勻平整，有時候需要事先倒一點固體培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿中，就是雙層平板。
3.平板涂布法優(yōu)勢和劣勢
(1)涂布技術不好，經(jīng)常涂布不勻，無法計數(shù)。
(2)不需要控制固體培養(yǎng)基溫度。
(3)可以將所有單菌落挑出來，保存，用于后續(xù)試驗。
4.傾注平板法優(yōu)勢和劣勢
(1)不需要涂布，省去了涂布不勻的麻煩。
(2)需要控制固體培養(yǎng)基溫度。
(3)無法將所有單菌落挑出來。
相關新聞推薦
1、水體擾動對藻生長機制與QCS水庫富營養(yǎng)化控制的影響研究
2、不同劑量SPP對人結(jié)腸癌DLD-1細胞能量代謝的影響（二）
3、人參外泌體改變巨噬細胞極化狀態(tài)，抑制非小細胞肺癌細胞的生長的分子機制（一）