2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1噬藻斑的觀察
用雙層平板法培養(yǎng)噬藻體S-H35，置于25℃，1000 lux的恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周左右，即可觀察到直徑1 mm的半透明的噬藻斑，10天左右，噬藻斑的直徑可以擴(kuò)大到1～2 cm。
2.2透射電鏡觀察
S-H35尾部很短幾乎不可見，因此推測屬于短尾病毒科，頭部直徑約為40 nm（圖1）。
2.3 S-H35的一步生長曲線
如圖2所示，噬藻體S-H35的潛伏期約為4 h，爆發(fā)期約為8 h，裂解量為125。
2.4 S-H35的宿主專一性鑒定
侵染結(jié)果顯示，S-H35除了能侵染聚球藻WH8102外，還能侵染聚球藻WH7803、LTW Red1和MW01，因此推測，噬藻體S-H35不具有種屬特異性。
2.5 S-H35的基因組分析
噬藻體S-H35的基因組長度為175321 bp，共含有228個(gè)ORF，基因的平均長度為649 bp，基因總長度占基因組總長度的比為84.4%，GC含量為41.3%，tRNA個(gè)數(shù)為8個(gè)，rRNA為1個(gè)。
對其ORF進(jìn)行預(yù)測，統(tǒng)計(jì)結(jié)果為228個(gè)，其中有21個(gè)（9.2%）是檢索不到假定功能（putative function）的，在所有的ORF中，有74個(gè)（32.4%）能夠檢索到功能注釋的結(jié)果，有133（58.3%）個(gè)ORF未能推測其功能。
S-H35的基因組中，基因的功能，大概可分為以下幾類：噬藻體自身結(jié)構(gòu)組成；DNA復(fù)制與修復(fù)、包裝；末端酶；以及對宿主藻的生理活動(dòng)起輔助作用的基因。
為了研究噬藻體S-H35的系統(tǒng)發(fā)生分析，利用蛋白軟件和系統(tǒng)分析軟件Mega6.06進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生分析。由于S-H35屬于短尾噬藻體，故選用短尾噬藻體的高度保守序列—DNA聚合酶基因所編碼的蛋白序列與選定的噬藻體的序列用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。從圖3中可以看出，S-H35與Synechococcus phage ACG-2014c及Synechococcus phage syn9在進(jìn)化上的關(guān)系更近。
3討論
噬藻體的基因組比對分析結(jié)果顯示，噬藻體S-H35跟其它噬藻體并未有顯著相似性。這證明S-H35是從海水中分離得到的新噬藻體，S-H35的基因組序列信息對于以后噬藻體的分子生物學(xué)研究能夠提供有用的基礎(chǔ)信息。一步生長曲線顯示，噬藻體的S-H35的裂解期較長，裂解量較大。
S-H35基因組中的基因大部分功能未知，但是從同源比對中可以發(fā)現(xiàn)，有3個(gè)（ORF88、ORF162、ORF181）與轉(zhuǎn)錄有關(guān)；2個(gè)（ORF23、ORF162）很可能與RNA的組裝有關(guān)；8個(gè)（ORF24、ORF39、ORF87、ORF129、ORF144、ORF148、ORF171、ORF185）可能與DNA復(fù)制和修復(fù)有關(guān)，ORF24編碼DNA解旋酶，ORF39編碼DNA甲基化酶，ORF85編碼單鏈DNA結(jié)合蛋白；10個(gè)（ORF6、ORF52、ORF81、ORF133、ORF173、ORF191、ORF220、ORF221、ORF222、ORF228）與病毒包膜及結(jié)構(gòu)有關(guān)；ORF228與病毒侵染循環(huán)有關(guān)；ORF148編碼的是短尾科病毒的保守序列DNA聚合酶，能夠保證噬藻體的基因組準(zhǔn)確、迅速的復(fù)制以及產(chǎn)生更多的裂解后代。ORF143編碼MazG基因，具有高度的保守序列；除去與自身繁殖功能有關(guān)的ORF，S-H35基因組中也存在對宿主細(xì)胞有著重要功能的基因，如ORF107可以編碼光系ⅡD1蛋白，可以在宿主光系統(tǒng)受到強(qiáng)光損傷時(shí)，維持宿主的正常光合作用，滿足其對能量的需要。電泳檢測結(jié)果表明其為dsDNA，尾部很短幾乎不可見，因此推測屬于短尾病毒科。
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