隨著社會(huì)進(jìn)步、經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平的提高以及人類生活質(zhì)量的不斷改善，人們對(duì)含蛋白質(zhì)和脂肪較多的肉類的需求明顯增多，帶動(dòng)了肉類消費(fèi)的快速增長。在中國社會(huì)這一現(xiàn)象更加明顯，根據(jù)聯(lián)合國商品貿(mào)易統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)庫（UN Comtrade Database）數(shù)據(jù)，2000—2016年我國肉類進(jìn)口的年均增長率為8.8%，并且在未來將進(jìn)一步增長，這使得我國養(yǎng)殖業(yè)將面臨空前的機(jī)遇。然而，目前動(dòng)物疫病在世界范圍不斷蔓延，也使得我國養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)面臨著極大的威脅，獸用生物制品的開發(fā)與應(yīng)用就顯得尤為重要。在我國，疫苗仍是主要的獸用生物制品，在預(yù)防各類動(dòng)物疾病中起著重要作用，所以要通過不斷的探索來提高疫苗質(zhì)量，從而更好地為人類社會(huì)創(chuàng)造更多的價(jià)值。在疫苗的生產(chǎn)過程中越來越多的應(yīng)用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，而在漫漫人類歷史長河之中，細(xì)胞培養(yǎng)也只不過經(jīng)歷了短短六、七十年的時(shí)間，卻給人類創(chuàng)造了無限的可能，為許多的生物科學(xué)的開展起到了推動(dòng)作用，現(xiàn)已成為研究領(lǐng)域里一大熱點(diǎn)。細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求很高，溫度、氣壓、緩沖環(huán)境、營養(yǎng)、pH值等都會(huì)影響到細(xì)胞的生長。
在西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠的小反芻獸疫活疫苗（Clone 9株）生產(chǎn)過程中也涉及細(xì)胞培養(yǎng)過程，此次研究旨在探索細(xì)胞生長過程中血清對(duì)其生長的影響以及最適宜生產(chǎn)過程的血清比例，以期為獸用疫苗生產(chǎn)中的細(xì)胞培養(yǎng)提供科學(xué)依據(jù)和理論參考。
一、材料與方法
1.地理位置。西藏自治區(qū)位于我國西南邊陲，是五個(gè)少數(shù)民族自治區(qū)之一，地處北緯26.50至36.53，東經(jīng)78.25至99.06之間，平均海拔4000米以上，素有“世界屋脊”之稱。拉薩則是其首府，位于西藏高原的中部，喜馬拉雅山脈北側(cè)，海拔3650米，地處雅魯藏布江支流拉薩河中游河谷平原，全年多晴朗天氣，降雨稀少，全年日照時(shí)間在3000小時(shí)以上。
實(shí)驗(yàn)室位于拉薩北郊西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠廠區(qū)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜、超凈工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡以及滿足實(shí)驗(yàn)的基本材料和無菌環(huán)境。
圖1細(xì)胞生長隨血清比例增加的生長情況
2.研究方法。實(shí)驗(yàn)材料均來自西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠，于2017年4月開始準(zhǔn)備。提前制造實(shí)驗(yàn)室無菌環(huán)境，選取7個(gè)25毫升克式瓶作為傳代容器備用，并標(biāo)記好所用細(xì)胞種類及細(xì)胞代次、傳代時(shí)間、血清比例，此次用于傳代的細(xì)胞為DBN細(xì)胞F22，血清種類為馬血清，血清比例依次為0.15毫升（1%）、0.3毫升（2%）、0.45毫升（3%）、0.6毫升（4%）、0.75毫升（5%）、0.9毫升（6%）、1.05毫升（7%）。在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行傳代工作，并將克式瓶移至CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)及觀察。
3.數(shù)據(jù)記錄與分析。從4月17日開始觀察細(xì)胞生長情況并如實(shí)記錄，記錄結(jié)果如表1。為方便比較數(shù)據(jù)之間的差異，特將實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果表述為較差、差、良好三種情況，并記錄為表2。使用Microsoft excel 2010軟件處理數(shù)據(jù)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)胞生長情況為縱坐標(biāo)，用圖表工具中的柱狀圖對(duì)血清比例與細(xì)胞生長之間的相互關(guān)系進(jìn)行分析，并作圖（圖1）。
表1各營養(yǎng)液梯度細(xì)胞生長情況
表2細(xì)胞生長隨血清比例增加的生長情況
二、結(jié)果分析
經(jīng)數(shù)據(jù)處理，并做出簡略柱狀圖來表示細(xì)胞生長情況與血清濃度之間的相互關(guān)系。由圖表可知，在此次實(shí)驗(yàn)中，隨著血清比例的增加細(xì)胞生長情況逐漸變好，而且細(xì)胞數(shù)量依次增加。同一環(huán)境下，血清濃度對(duì)細(xì)胞生長情況的影響呈現(xiàn)出先增加后減弱的拋物線狀現(xiàn)象。
三、討論與結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)觀察是從細(xì)胞培養(yǎng)后的第三天開始的，主要是因?yàn)樵谛》雌c獸疫活疫苗的細(xì)胞培養(yǎng)周期為6日，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)論定為最適血清4%～6%是根據(jù)拋物線軸對(duì)稱特性，故將5%血清定為適宜細(xì)胞生長的條件。
通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的觀察分析可以發(fā)現(xiàn)，此次實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞的生長對(duì)血清的依賴度還是較大的，低濃度下對(duì)細(xì)胞存在抑制作用，而高濃度血清條件下可促進(jìn)細(xì)胞的生長。但作為疫苗生產(chǎn)中的細(xì)胞培養(yǎng)過程，并不是血清濃度越高越好，從數(shù)據(jù)中可以看出，血清濃度到達(dá)一定高度后使得細(xì)胞生長過量，影響細(xì)胞生長情況的觀察。因此，為更好地配合生產(chǎn)需求以及節(jié)約成本考慮，細(xì)胞培養(yǎng)中加入4%～6%的血清量最為合適。
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