2結(jié)果與分析
2.1鼠李糖乳桿菌Probio-M9連續(xù)培養(yǎng)100代過(guò)程中表型研究
2.1.1繪制生長(zhǎng)曲線
不同的生長(zhǎng)周期，菌種的生理狀態(tài)有所差異，因此，菌種的傳代通常選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末期或者穩(wěn)定期初期為宜，以1%的接種量，將原始菌株接種于液體MRS培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24 h過(guò)程中OD600nm值變化情況如圖1所示。
圖1鼠李糖乳桿菌Probio-M9原始菌株生長(zhǎng)曲線
由圖1可知鼠李糖乳桿菌Probio-M9在37℃恒溫培養(yǎng)24 h過(guò)程中OD600nm值的變化趨勢(shì)，0～2 h鼠李糖乳桿菌Probio-M9處于延滯期，2～20 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，20 h后進(jìn)入穩(wěn)定期，這與Liu等對(duì)鼠李糖乳桿菌Probio-M9生長(zhǎng)特性研究結(jié)果基本一致?；罹鷶?shù)變化趨勢(shì)與OD600nm值總體相似，初始接入活菌數(shù)為（1.37±1.40）×106CFU/mL，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（2～20 h）活菌數(shù)增加至（1.64±0.71）×108CFU/mL，且此后隨著時(shí)間推移活菌數(shù)不再增加。如圖1所示，20～24 h時(shí)雖OD600nm值略有增加，但活菌數(shù)基本維持不變，表明在20～24 h期間鼠李糖乳桿菌Probio-M9生長(zhǎng)已處于穩(wěn)定期。參照1.2.1.3節(jié)菌株生長(zhǎng)代時(shí)計(jì)算方法，到達(dá)穩(wěn)定期鼠李糖乳桿菌Probio-M9的生長(zhǎng)代數(shù)約為6.90代，且一直培養(yǎng)到24 h仍處于穩(wěn)定期，同時(shí)考慮到便于連續(xù)傳代操作，故選擇每個(gè)培養(yǎng)周期為（24±0.50）h作為傳代周期。
2.1.2菌株連續(xù)傳代過(guò)程中的菌體形態(tài)觀察
對(duì)鼠李糖乳桿菌Probio-M9 A0、A25、A50、A75和A100菌懸液進(jìn)行革蘭氏染色并在顯微鏡下觀察菌體形態(tài)，發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳桿菌Probio-M9連續(xù)傳100代菌體形態(tài)均屬于鼠李糖乳酪桿菌典型形態(tài)，且在連續(xù)傳代過(guò)程中，各代時(shí)的菌體形態(tài)無(wú)明顯差異。
2.1.3菌株連續(xù)傳代過(guò)程中碳水化合物利用能力
本試驗(yàn)對(duì)連續(xù)傳代培養(yǎng)的鼠李糖乳桿菌Probio-M9的碳水化合物代謝能力進(jìn)行了分析。原始菌株及連續(xù)培養(yǎng)傳代過(guò)程中（0，25，50，75，100代）的菌株對(duì)49種不同碳水化合物的代謝能力進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2不同代時(shí)鼠李糖乳桿菌Probio-M9碳水化合物（API 50CH）利用情況
由表2可知，鼠李糖乳桿菌Probio-M9可利用28種碳水化合物：丙三醇、D-核糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-山梨糖、L-鼠李糖、肌醇、甘露醇、山梨醇、甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷、N-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七葉靈-檸檬酸鐵、水楊苷、D-纖維二糖、D-麥芽糖、D-乳糖、D-蔗糖、D-海藻糖、D-松三糖、D-龍膽二糖、D-土倫糖、D-來(lái)蘇糖、D-塔格糖和葡萄糖酸鉀。鼠李糖乳桿菌Probio-M9在連續(xù)培養(yǎng)100代過(guò)程中，5個(gè)不同代時(shí)（A0/A25/A50/A75/A100代）的碳水化合物利用能力無(wú)變化，說(shuō)明鼠李糖乳桿菌Probio-M9連續(xù)培養(yǎng)100代對(duì)其碳水化合物的代謝能力沒(méi)有影響，菌株在此連續(xù)培養(yǎng)傳代過(guò)程中穩(wěn)定。
2.1.4菌株傳代過(guò)程靶向代謝物分析
本研究對(duì)鼠李糖乳桿菌Probio-M9在連續(xù)傳代過(guò)程中，各代時(shí)（0/25/50/75/100代）菌株有機(jī)酸及短鏈脂肪酸代謝物進(jìn)行分析，結(jié)果表明如圖3所示，各代時(shí)（0/25/50/75/100代）在苯乳酸（Phenyllactic acid）、檸檬酸（Citric acid）、酒石酸（Tartaric acid）蘋(píng)果酸（malic Acid）、琥珀酸（Succinic acid）、4-羥基苯乳酸（4-Hydroxyphenyllactic acid）、苯甲酸（Benzoic acid）、草酸（Oxalate）、水楊酸（Salicylic acid）、苯丙酸（Propionic acid）、乳酸（Lactic acid）、丙酸（Propionic acid）、丁酸（Butyrate）、己酸（Hexanoic acid）、乙酸（Acetic acid）等代謝物質(zhì)之間無(wú)明顯差異。
圖3不同代時(shí)鼠李糖乳桿菌Probio-M9靶向代謝特征比較
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