2結(jié)果
2.1 Western blot檢測(cè)ING5蛋白表達(dá)
為了檢測(cè)ING5是否在所轉(zhuǎn)染細(xì)胞中高表達(dá)，將A549-control和ING5高表達(dá)細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)用細(xì)胞裂解液提取總蛋白，Western blot結(jié)果顯示與A549-control相比，ING5在A549-ING5-OE細(xì)胞中表達(dá)量顯著增高。
2.2 ING5抑制肺癌細(xì)胞增殖
顯微鏡下觀察可見(jiàn)A549-control和A549-ING5-OE細(xì)胞生長(zhǎng)良好，緊密排列，形態(tài)為梭形，細(xì)胞之間形成連接。A549-ING5-OE細(xì)胞的增殖速度明顯低于A549-control細(xì)胞，增殖速度為A549-control的一半，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
2.3 ING5抑制肺癌細(xì)胞克隆形成能力
A549-control和A549-ING5-OE細(xì)胞接種在6孔板15 d后，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)多于50個(gè)的克隆，結(jié)果表明與A549-control相比ING5高表達(dá)肺癌細(xì)胞的克隆形成能力明顯降低，A549-ING5-OE細(xì)胞的克隆形成率為A549-control細(xì)胞的50%，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
2.4 ING5抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長(zhǎng)
裸鼠皮下接種A549-control和A549-ING5-OE細(xì)胞，7 d后成瘤，隨著時(shí)間的增加，接種A549-control裸鼠腫瘤生長(zhǎng)較快，接種A549-ING5-OE的裸鼠腫瘤生長(zhǎng)明顯較慢，結(jié)果表明ING5高表達(dá)后顯著抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長(zhǎng)。
2.5接種A549-ING5-OE及A549-control細(xì)胞后大鼠體積變化情況
接種A549-ING5-OE細(xì)胞成瘤，腫瘤體積大小基本無(wú)增加。A549-control細(xì)胞接種成瘤，腫瘤體積明顯增大。從腫瘤生長(zhǎng)曲線可以看出ING5高表達(dá)的肺癌細(xì)胞腫瘤生長(zhǎng)明顯被抑制，腫瘤體積較對(duì)裸鼠A549-control細(xì)胞接種顯著減小。
3討論
作為候選抑癌基因家族成員，近年來(lái)ING家族在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用和機(jī)制受到越來(lái)越多的關(guān)注。路美玲等研究結(jié)果表明，與正常肝組織相比，肝癌細(xì)胞株ING5 mRNA表達(dá)明顯降低，在腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中與正常組織相比ING5表達(dá)明顯被抑制。趙春陽(yáng)等研究結(jié)果表明，在腫瘤細(xì)胞中ING5表達(dá)水平越低，腫瘤的惡性程度就越高。
研究表明，肺癌的發(fā)生、發(fā)展以及侵襲、轉(zhuǎn)移是多基因參與、多步驟發(fā)生的過(guò)程。隨著近年來(lái)外科技術(shù)發(fā)展的日趨完善，新的化學(xué)治療藥物和局部治療方法不斷出現(xiàn)，但對(duì)肺癌的總體治療效果卻不甚理想，因此從分子水平研究肺癌發(fā)生、發(fā)展中的分子機(jī)制，針對(duì)肺癌中異常分子的治療藥物和治療方法就成了新的研究熱點(diǎn)，并促進(jìn)了肺癌分子靶向治療的出現(xiàn)。本研究中，通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法使ING5在A549細(xì)胞中高表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ING5高表達(dá)后與對(duì)照肺癌細(xì)胞相比，其增殖能力和克隆形成能力均降低，說(shuō)明在細(xì)胞水平ING5抑制了肺癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力。通過(guò)裸鼠在體水平的研究同樣發(fā)現(xiàn)，ING5抑制了裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長(zhǎng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果同樣說(shuō)明ING5抑制了肺癌細(xì)胞的增殖，與上述細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。
綜上所述，ING5在肺癌細(xì)胞高表達(dá)后抑制了肺癌細(xì)胞的增殖，提示ING5在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中起到了抑癌基因的作用，為肺癌的基因治療提供了新的靶點(diǎn)。
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