2結(jié)果與分析
2.1孢子萌發(fā)率和芽管長度分析
真菌侵染花生、玉米等主要通過如下途經(jīng)孢子附著在其表面、在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下萌發(fā)、菌絲不斷擴(kuò)張，從而導(dǎo)致食物污染。抑制孢子萌發(fā)率和芽管長度是抑制真菌污染的重要指標(biāo)。
姜黃素連續(xù)處理對黃曲霉的孢子萌發(fā)率和芽管長度抑制情況如圖1所示。
圖1姜黃素對黃曲霉孢子萌發(fā)率和芽管長度的抑制作用
由圖1可知:與污染陽性對照組相比，姜黃素處理組的黃曲霉孢子萌發(fā)率和芽管長度降低;污染陽性對照組的黃曲霉孢子萌發(fā)率為92.7%，姜黃素處理組的黃曲霉孢子萌發(fā)率為81.3%，降低了11.4%;黃曲霉孢子芽管長度實驗中污染陽性對照組長度為45.8μm，姜黃素處理組為32.6μm，芽管長度降低了28.8%。結(jié)果表明，姜黃素連續(xù)處理可以在一定程度上抑制黃曲霉孢子萌發(fā)率和芽管長度(P<0.05)。
2.2抑菌劑對病原菌抑制效果
為了探究姜黃素對黃曲霉是否抑制，首先在體外實驗中，通過平板實驗，在培養(yǎng)基中加入姜黃素觀察其對黃曲霉菌落的生長情況。
姜黃素對黃曲霉的抑制情況如圖2所示。從圖2可以看出:姜黃素處理后明顯地抑制了黃曲霉菌落的生長;相對于污染陽性對照組，黃曲霉正常生長直徑平均為14 cm，而姜黃素處理組的黃曲霉生長直徑為11 cm，抑制生長率為21.4%。可以看出，加入姜黃素對黃曲霉的生長具有抑制作用(P<0.05)。
圖2姜黃素對黃曲霉生長抑制情況
2.3姜黃素對AFB1產(chǎn)生量的抑制作用
農(nóng)產(chǎn)品遭受黃曲霉的污染主要是由于其能夠產(chǎn)生致命性黃曲霉毒素B1，通過檢測黃曲霉毒素B1含量，能夠進(jìn)一步評估姜黃素對黃曲霉的抑制作用。樣品經(jīng)過濾處理后，通過免疫親和柱的富集，再經(jīng)過三氟乙酸進(jìn)行柱前衍生，樣品置于高效液相色譜(high performance liquid chromatogrphy，HPLC)熒光檢測器檢測。黃曲霉毒素B1產(chǎn)量如圖3所示。
圖3姜黃素對AFB1產(chǎn)生量的抑制作用
由圖3可知:姜黃素處理組的黃曲霉毒素B1的產(chǎn)生量為23.8 ng/g，污染陽性對照組的產(chǎn)生量為47.5 ng/g;相比之下，姜黃素處理組毒素降低了46.9%。分析結(jié)果可知，姜黃素能夠顯著降低黃曲霉毒素B1的產(chǎn)生(P<0.05)。因此，姜黃素作為天然的抑菌劑具有極大的開發(fā)潛力。
2.4洋蔥穿透實驗結(jié)果
黃曲霉在發(fā)生侵染時，本文首先通過芽孢萌發(fā)產(chǎn)生菌絲，然后通過菌絲汲取生存所需要的養(yǎng)分。菌絲的活力強(qiáng)弱會影響黃曲霉侵染的嚴(yán)重程度。通過對菌絲做洋蔥表皮穿透實驗，測試菌絲活力。
臺盼藍(lán)染色后在顯微鏡下觀察，孢子穿透洋蔥表皮如圖4所示。從圖4可以看出，污染陽性對照組在萌發(fā)生長后，菌絲穿透洋蔥表皮進(jìn)入洋蔥細(xì)胞內(nèi)，這會導(dǎo)致在洋蔥細(xì)胞外部的菌絲會被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色，而留在內(nèi)部的菌絲未被染色。姜黃素處理組的黃曲霉菌絲大都被染上了藍(lán)色，黃曲霉的菌絲活性降低，說明姜黃素降低了黃曲霉菌絲的穿透能力。
圖4姜黃素對黃曲霉菌絲穿透力的影響
2.5侵染花生實驗結(jié)果
因為花生易受黃曲霉的侵染，所以在之前平板抑制實驗的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步評估姜黃素對黃曲霉的防控效果。黃曲霉侵染花生情況如圖5所示。
圖5姜黃素對花生黃曲霉病的抑制作用
從圖5可以看出，培養(yǎng)7 d后，污染陽性對照組花生全部發(fā)病，而姜黃素處理組的花生僅是輕微感染，發(fā)病情況明顯低于污染陽性對照組，因此姜黃素具有開發(fā)為新型抑菌劑控制食品和飼料原料中黃曲霉污染的前景。
2.6花生感官評價結(jié)果
花生感官評價結(jié)果見表2所列。由表2可知，濃度為0.3 mmol/L姜黃素的加入并不會顯著影響花生的口感和氣味(P>0.05)，但是對于花生的色澤產(chǎn)生了顯著性的影響(P<0.05)，使用清水清洗后會顯著減少姜黃素對花生色澤的影響(P<0.05)。結(jié)果表明，姜黃素的加入并不會影響花生的氣味和口感，對姜黃素應(yīng)用具有重要的意義。
表2花生感官評價結(jié)果
2.7抑菌劑對病原菌形態(tài)學(xué)的影響
通過實驗發(fā)現(xiàn)，姜黃素連續(xù)處理3代對黃曲霉形態(tài)的影響如圖6所示。由圖6可知，在添加抑菌劑的黃曲霉中，姜黃素處理組連續(xù)處理3代孢子的顏色呈現(xiàn)出乳白色，而污染陽性對照組培養(yǎng)連續(xù)3代仍然呈現(xiàn)黃綠色。結(jié)果表明，姜黃素會抑制黃曲霉孢子色素的合成。
圖6姜黃素連續(xù)處理3代對黃曲霉形態(tài)的影響
2.8黃曲霉對姜黃素的耐受性
為了探究黃曲霉對姜黃素的耐受性，通過對黃曲霉3代的不斷培養(yǎng)，第3代孢子感染花生情況如圖7所示。
圖7姜黃素平板連續(xù)培養(yǎng)3代黃曲霉侵染花生發(fā)病情況
從圖7可以看出，在污染陽性對照組中花生全部發(fā)病，而在姜黃素處理組中，花生僅部分感染。這說明經(jīng)過姜黃素處理3代后的黃曲霉孢子侵染能力明顯下降。結(jié)果表明，經(jīng)過姜黃素處理后產(chǎn)生的黃曲霉孢子的活性同樣受到一定的抑制作用，黃曲霉對姜黃素并沒有產(chǎn)生耐受性，因此姜黃素具有作為一種長期抑菌劑的潛力。
3結(jié)論
本文主要研究了姜黃素對黃曲霉的抗真菌效果。通過姜黃素對黃曲霉抑制效果、形態(tài)學(xué)影響、菌絲的活力檢驗、毒素產(chǎn)量檢測、侵染花生實驗以及黃曲霉對姜黃素的耐受性實驗，初步證明姜黃素對黃曲霉具有抑制作用。下一步實驗將對相關(guān)抑制機(jī)理進(jìn)行研究，以期對黃曲霉抑制提供新的思路。
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