摘要:目的探討人工閱讀DL-Bt64血培養(yǎng)系統(tǒng)不典型生長(zhǎng)曲線在鑒別血培養(yǎng)假陰性標(biāo)本中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法將常見的生長(zhǎng)曲線分為I~Ⅲ型，并以盲種培養(yǎng)法作為判定真陰性和假陰性的“金標(biāo)準(zhǔn)”。選取2180瓶經(jīng)全自動(dòng)血培養(yǎng)儀判讀為陰性的靜脈血培養(yǎng)物標(biāo)本，通過分析采血量和患者的抗生素應(yīng)用史，探討不典型生長(zhǎng)曲線及假陰性的形成原因。進(jìn)一步采用A(抽取培養(yǎng)物，涂片并革蘭染色)和B(人工閱讀并分析各種不典型生長(zhǎng)曲線)兩種方法篩查假陰性標(biāo)本，通過比較兩種方法的敏感性，特異性、準(zhǔn)確率和陽性預(yù)測(cè)值，評(píng)估方法B的臨床應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果﹐2180瓶培養(yǎng)物中，用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法共檢出110瓶假陰性標(biāo)本，其余2070瓶為真陰性標(biāo)本。99.09%(109/110)的假陰性標(biāo)本的生長(zhǎng)曲線不典型，且97.27%(107/110)的不典型生長(zhǎng)曲線與采血量不符合要求或?yàn)E用抗生素有關(guān)。79.09%的假陰性標(biāo)本生長(zhǎng)曲線延遲抬頭，符合Ⅲ型。方法A與“金標(biāo)準(zhǔn)”方法結(jié)果完全一致。方法B篩選出140瓶疑似假陰性標(biāo)本，經(jīng)“金標(biāo)準(zhǔn)”方法確認(rèn)，109瓶為假陰性，31瓶為真陰性;其余2040瓶標(biāo)本經(jīng)“金標(biāo)準(zhǔn)"方法確認(rèn)，l瓶為假陰性，2039瓶為真陰性。方法B的敏感性(99.09%)和特異性(99.95%)與方法A相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X值分別為0.90和2.01，P>0.05)。方法B的準(zhǔn)確率(98.53%)和陽性預(yù)測(cè)值(77.86%)顯著低于方法A(X值分別為32.13和54.23，P<0.01)。結(jié)論絕大多數(shù)假陰性標(biāo)本的生長(zhǎng)曲線不典型，與采樣量不符合要求或抗生素濫用有關(guān)。通過人工閱讀細(xì)菌生長(zhǎng)曲線，能夠高效篩選假陰性標(biāo)本。
目前臨床上常用于鑒別假陰性的方法是培養(yǎng)物盲種法和涂片鏡檢法，但對(duì)每例陰性標(biāo)本都進(jìn)行盲種培養(yǎng)和涂片鏡檢，工作量巨大，且無法滿足目前的臨床需求。本研究旨在分析導(dǎo)致血培養(yǎng)標(biāo)本假陰性的影響因素，探討人工閱讀不典型生長(zhǎng)曲線鑒別血培養(yǎng)假陰性標(biāo)本的臨床意義，報(bào)告如下。
1材料與方法
1.1儀器與試劑
DL?Bt64型全自動(dòng)血培養(yǎng)儀和配套培養(yǎng)瓶、SCAN?10全自動(dòng)細(xì)菌加樣儀、DL?96Ⅱ型全自動(dòng)細(xì)菌檢定儀和配套的體外鑒定板條，90mm血平板和巧克力平板(上?？瓶片敿紊锛夹g(shù)公司)，快速格蘭染色試劑盒。
1.2研究對(duì)象
收集2020年1月至2022年12月徐州市銅山區(qū)人民醫(yī)院ICU、腦外科、胸外科及呼吸科就診的高熱患者1228例，男520例，女708例，年齡18~92歲，中位年齡55歲。要求臨床醫(yī)護(hù)人員在使用抗生素之前采集雙側(cè)或單側(cè)靜脈血，分別注入需氧血培養(yǎng)瓶，每瓶8~10mL。納入標(biāo)準(zhǔn):采血時(shí)體溫≥38.5℃，年齡≥18歲，且血培養(yǎng)儀自動(dòng)判讀為陰性的標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡<18歲;(2)血培養(yǎng)儀自動(dòng)判讀為陽性的標(biāo)本。根據(jù)廠家說明書，將DL?Be64型全自動(dòng)血培養(yǎng)儀參數(shù)設(shè)置如下:陽性閾值為350反射單位(Reflectanceunits，Runit)，有瓶最小值為100Runit，報(bào)警頻率為2300Hz，報(bào)警時(shí)長(zhǎng)為300ms，培養(yǎng)時(shí)間5d，生長(zhǎng)曲線突破陽性閾值線時(shí)判讀為陽性。共收集到血培養(yǎng)儀判讀為陰性的樣本2180瓶，經(jīng)盲種培養(yǎng)法確認(rèn)，2070瓶為真陰性，110瓶為假陰性。查詢患者病歷，110瓶假陰性標(biāo)本中，有85瓶在采樣前經(jīng)驗(yàn)性輸注了抗生素?？股厥褂们闆r見表1。
1.3方法
1.3.1盲種培養(yǎng)法
使用無菌注射器從陰性培養(yǎng)瓶中抽取0.1~0.2mL培養(yǎng)物，分別轉(zhuǎn)種于血平板和巧克力平板，在35℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48h。若無細(xì)菌生長(zhǎng)，判為真陰性;若有細(xì)菌生長(zhǎng)，判為假陰性，挑取部分菌落，涂片并經(jīng)革蘭染色后使用顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。以此結(jié)果作為判斷真陰性和假陰性的“金標(biāo)準(zhǔn)”。挑取適量菌落，根據(jù)廠家說明書配制菌液并加入至相應(yīng)鑒定和藥敏板條中，在35℃、5%CO2條件下培養(yǎng)18~24h，采用DL?96Ⅱ細(xì)菌鑒定儀鑒定菌種并檢測(cè)最小抑菌濃度(mini?muminhibitoryconcentration，MIC)值。
表1假陰性標(biāo)本采樣前抗生素使用情況
1.3.2方法A
檢測(cè)全自動(dòng)培養(yǎng)結(jié)束后，取出陰性培養(yǎng)瓶，使用75%酒精進(jìn)行滅菌處理。使用無菌注射器抽取適量培養(yǎng)物涂于潔凈玻片上，經(jīng)革蘭染色后采用油鏡觀察，若檢出細(xì)菌則判定該瓶培養(yǎng)結(jié)果為假陰性。
1.3.3方法B
檢測(cè)采用人工閱讀DL?Bt64型全自動(dòng)血培養(yǎng)生長(zhǎng)曲線，將常見的生長(zhǎng)曲線分為Ⅰ~Ⅷ型(圖1)。其中Ⅰ型:生長(zhǎng)曲線呈平直狀，處于閾值線以下，是典型的陰性曲線;Ⅱ型:生長(zhǎng)曲線呈“S”形，突破閾值線，有明顯的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，是典型的陽性曲線;Ⅲ和Ⅳ型:生長(zhǎng)曲線起始點(diǎn)位于閾值線下方，呈“S”形抬頭，但是未能突破閾值線;Ⅴ和Ⅵ型:生長(zhǎng)曲線起始點(diǎn)均在閾值線之上，其中Ⅴ型呈“S”形抬頭，但很快進(jìn)入平臺(tái)期，而Ⅵ型呈水平直線狀;Ⅶ和Ⅷ型:生長(zhǎng)曲線起始點(diǎn)處于閾值線下方或上方，呈直線斜向上，無明顯遲緩期、加速期和對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。其中，Ⅰ和Ⅱ型是典型的生長(zhǎng)曲線，易被監(jiān)測(cè)系統(tǒng)識(shí)別，而Ⅲ~Ⅷ型生長(zhǎng)曲線難以被監(jiān)測(cè)系統(tǒng)識(shí)別，不能排除瓶?jī)?nèi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的可能，稱為“不典型生長(zhǎng)曲線”。根據(jù)目測(cè)采血量和抗生素濫用情況以及細(xì)菌藥敏結(jié)果，分析各種不典型生長(zhǎng)曲線的形成原因。
注:Runit，反射單位;Ⅰ和Ⅱ型為常見的典型生長(zhǎng)曲線;Ⅲ~Ⅷ為不典型生長(zhǎng)曲線。
圖1方法B檢測(cè)各種類型的生長(zhǎng)曲線
1.4方法
A、B的篩選效能評(píng)價(jià)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件和χ2檢驗(yàn)比較方法A和B的準(zhǔn)確率、特異性、敏感性和陽性預(yù)測(cè)值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
人工閱讀不典型生長(zhǎng)曲線鑒別血培養(yǎng)假陰性標(biāo)本的臨床意義（一）
人工閱讀不典型生長(zhǎng)曲線鑒別血培養(yǎng)假陰性標(biāo)本的臨床意義（二）
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