洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）是一種廣泛存在于水、土壤、植物和人體中的革蘭氏陰性桿菌。作為條件致病菌，能引起多種醫(yī)院感染，包括敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎、傷口感染和膿腫等，且該菌在患者和患者之間具有較強(qiáng)的傳播能力，由于其多重耐藥特性，治療相當(dāng)困難，一旦在醫(yī)院內(nèi)出現(xiàn)暴發(fā)流行很難控制。目前該菌已經(jīng)被FDA明確為不可接受微生物（objectionable microorganism），根據(jù)FDA網(wǎng)站數(shù)據(jù)顯示，從2019年1月至2021年8月因微生物污染被召回的26批化妝品中，有8批被洋蔥伯克霍爾德菌污染，占比高達(dá)31%。筆者將實(shí)驗(yàn)室近三年來微生物檢測(cè)不合格化妝品中污染菌分離鑒定后發(fā)現(xiàn)，洋蔥伯克霍爾德菌的檢出率遠(yuǎn)高于《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中要求的金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌，可見目前國(guó)內(nèi)化妝品被洋蔥伯克霍爾德菌污染的風(fēng)險(xiǎn)較高。
在各領(lǐng)域現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)體系中，洋蔥伯克霍爾德菌定性檢驗(yàn)方法有3種：SN/T 4684—2016《進(jìn)出口化妝品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法》、SN/T 4485—2016《進(jìn)出口口腔清潔類產(chǎn)品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法》及USP＜60＞Microbiological examination of nonsterile products-test for Burkholderia cepacia complex。而筆者在化妝品中分離到的一株洋蔥伯克霍爾德菌，在上述3種檢驗(yàn)方法中的選擇性培養(yǎng)基中均無法生長(zhǎng)，如果污染了該分離菌的樣品采用這3種方法檢驗(yàn)，則無法檢出，因此提升化妝品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法的適用性很有必要。本文以該樣品分離菌及3株洋蔥伯克霍爾德菌標(biāo)準(zhǔn)菌株作為測(cè)試菌，選取3種標(biāo)準(zhǔn)中使用的液體培養(yǎng)基，開展生長(zhǎng)特性研究；并通過測(cè)試慶大霉素對(duì)各試驗(yàn)菌的最低抑菌濃度，非目標(biāo)菌抑制試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等，分析了該分離菌無法被檢出的主要原因，確定檢驗(yàn)方法中最優(yōu)的抗生素添加劑，并以此為依據(jù)對(duì)化妝品中洋蔥伯克霍爾德菌的檢驗(yàn)方法提幾點(diǎn)改進(jìn)建議。
1儀器與材料
1.1儀器
MSC-Advantage A2型生物安全柜，BF400恒溫培養(yǎng)箱，GF54DA立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器。
1.2菌株
洋蔥伯克霍爾德菌：1株為本實(shí)驗(yàn)室從樣品中分離獲得（編號(hào)A，同下文），另3株標(biāo)準(zhǔn)菌株分別為ATCC 25416、ATCC BAA-245及ATCC BAA-247，來自美國(guó)典型菌種保藏中心。
非目標(biāo)菌：金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003、大腸埃希菌CMCC（B）44102、乙型副傷寒沙門氏菌CMCC（B）50094及銅綠假單胞菌CMCC（B）10104，均來自中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌菌種保藏管理中心。
1.3培養(yǎng)基及配套試劑
1.3.1 USP＜60＞培養(yǎng)基
pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（pH7.0），TSB以及洋蔥伯克霍爾德菌選擇性瓊脂（BCSA++）均來自廣東環(huán)凱。
1.3.2 SN/T 4684—2016培養(yǎng)基
含慶大霉素的洋蔥伯克霍爾德菌增菌液（BCSB+），含多黏菌素B的SCDLP增菌液（SCDLP+），含多黏菌素B和慶大霉素的洋蔥伯克霍爾德菌選擇性瓊脂（BCSA+）及含多黏菌素B和慶大霉素的麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MAC+）來自青島海博。
1.3.3 SN/T 4485—2016培養(yǎng)基
SCDLP，改良letheen肉湯（MLET）來自廣東環(huán)凱，BCC培養(yǎng)基（BCA++）來自北京三藥。
1.3.4配套試劑洋蔥伯克霍爾德菌選擇性瓊脂（BCSA）配套試劑來自廣東環(huán)凱，BCC培養(yǎng)基配套試劑來自北京三藥。
1.3.5其他培養(yǎng)基TSA、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MAC）均來自廣東環(huán)凱；TSA對(duì)照培養(yǎng)基來自中檢院。
1.4試劑
（1）生理鹽水：按GB 7918.1—1987依法配制。
（2）慶大霉素溶液（1 mg/mL）：購(gòu)自青島海博。
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