細(xì)菌廣泛分布于我們的生活環(huán)境中，是空氣和水中的微生物指標(biāo)之一。空氣中的細(xì)菌總數(shù)是指1m3空氣中各種細(xì)菌的總數(shù)目。水中的細(xì)菌總數(shù)是指1ml水樣在普通瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落總數(shù)。一般認(rèn)為每1ml水中細(xì)菌總數(shù)小于100個(gè)為極清潔的水，100～1000個(gè)為清潔水，1000～10000個(gè)為不太清潔水，10000個(gè)以上即為不清潔水。人們飲用了不清潔的水可產(chǎn)生各種疾病，如:細(xì)菌性痢疾、霍亂沙門(mén)氏菌病等。


1材料與方法


1.1實(shí)驗(yàn)器材


培養(yǎng)皿(直徑90～100mm)，500ml大燒杯，100℃溫度計(jì)，500ml三角瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫生化培養(yǎng)箱，放大鏡。


1.2培養(yǎng)基的配方


蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、氯化鈉5g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml。


2總結(jié)與討論


2.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程


培養(yǎng)基在配制時(shí)各種配方稱(chēng)好后混于水中，經(jīng)過(guò)加熱熔化，熔化過(guò)程中要不斷攪拌使各成分均勻混于水中，并在加熱同時(shí)不斷補(bǔ)充失去的水分，以補(bǔ)足至原來(lái)的體積。否則培養(yǎng)基各成份混合不均勻，水分不足，培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)不全，不利于細(xì)菌生長(zhǎng)。配制好的培養(yǎng)基若有沉渣或混濁，趁熱用三至四層紗布過(guò)濾，濾液最好用pH計(jì)調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.4，過(guò)酸或過(guò)堿都不利于細(xì)菌生長(zhǎng)，并在2h內(nèi)滅菌。滅菌的高壓鍋?zhàn)詈檬菃为?dú)使用放于無(wú)菌室中，滅菌好的培養(yǎng)基可于高壓鍋中存放1～2h;待無(wú)菌室滅菌后，再打開(kāi)高壓鍋取出備用，以達(dá)到備用培養(yǎng)基絕對(duì)無(wú)菌。


2.2無(wú)菌室的滅菌


一般要求只要打開(kāi)無(wú)菌室的紫外燈20min后，無(wú)菌室就可以達(dá)到無(wú)菌，但經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證無(wú)法達(dá)到要求，細(xì)菌空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)如表1所示。

表1空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)


從4組細(xì)菌空白實(shí)驗(yàn)可以看出無(wú)菌室達(dá)到真正無(wú)菌只要打開(kāi)無(wú)菌室紫外燈30min后，再打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)的風(fēng)機(jī)預(yù)熱20min后進(jìn)行水樣細(xì)菌接種實(shí)驗(yàn)，這樣就可得到相對(duì)準(zhǔn)確的細(xì)菌總數(shù)分析結(jié)果。這一結(jié)果是紫外燈更換90d左右所得。但紫外燈使用1a以上，接近1.5a，開(kāi)紫外燈30min后，再預(yù)熱無(wú)菌操作臺(tái)20min后進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，不能達(dá)到無(wú)菌室真正無(wú)菌的要求，建議紫外燈1a更換1次。


2.3培養(yǎng)基的溫度


水樣接種時(shí)，培養(yǎng)基的溫度非常關(guān)鍵，溫度高了容易把水樣中的細(xì)菌燙死，溫度低了一方面瓊脂培養(yǎng)基容易凝固(尤其在冬季)，另一方面水樣與培養(yǎng)基混合不均勻，培養(yǎng)出的菌落分不開(kāi)，成團(tuán)生長(zhǎng)，不易計(jì)數(shù)。培養(yǎng)基的溫度在40～45℃左右最佳，接種時(shí)最好用溫度計(jì)控制溫度，建議在無(wú)菌室放一個(gè)電爐，溫度達(dá)不到時(shí)，以便加熱使溫度保持在一定范圍內(nèi)，也可用熱水浴保持培養(yǎng)基的溫度。


3結(jié)論


試驗(yàn)表明，要準(zhǔn)確掌握水樣中的細(xì)菌總數(shù)，關(guān)鍵是細(xì)菌的培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)的前提不僅有配制良好且無(wú)菌培養(yǎng)基，真正無(wú)菌的接種室，而且要有接種時(shí)培養(yǎng)基適宜的溫度。


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