2結(jié)果與分析
2.1 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌菌落形態(tài)的影響
由圖1所示，氣調(diào)處理對(duì)枝孢菌的菌落形態(tài)有顯著影響。隨著CO2濃度的升高，枝孢菌的菌落直徑和孢子量逐漸減少，菌落顏色逐漸變淺，與ck處理形成鮮明對(duì)比。ck處理菌絲生長(zhǎng)旺盛且分布均勻，色素呈黃色或淺綠色，菌落邊緣較為整齊；而處理組菌絲生長(zhǎng)較慢，菌絲分布不均，且色素顏色較淺，菌落直徑逐漸變小且菌落邊緣不整齊。在6 d時(shí)，60%O2+40%CO2處理剛開(kāi)始長(zhǎng)出白色菌絲，尚未出現(xiàn)孢子；在12 d時(shí)，雖然已出現(xiàn)孢子，但仍未擴(kuò)展到整個(gè)菌落。
圖1枝孢菌菌落形態(tài)
2.2 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌微觀形態(tài)的影響
不同O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌微觀結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不同影響（圖2）。CK處理菌絲粗細(xì)均勻，表面光滑；90%O2+10%CO2處理菌絲表面平整，而菌絲內(nèi)出現(xiàn)隔膜；80%O2+20%CO2處理菌絲內(nèi)部出現(xiàn)隔膜以及空腔；70%O2+30%CO2處理菌絲表面凹凸不平，且隔膜處菌絲膨脹，中空嚴(yán)重；60%O2+40%CO2處理菌絲表面粗糙，菌絲出現(xiàn)分支，內(nèi)部隔膜與空腔增多。
圖2 12 d時(shí)枝孢菌在400×顯微鏡下的微觀形態(tài)
2.3 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)菌落直徑和孢子量的影響
隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理的菌落直徑與孢子量均呈上升趨勢(shì)，而10 d后增長(zhǎng)趨勢(shì)有所減緩（圖3）。孢子生成速率與菌落擴(kuò)展速率隨CO2濃度的升高而降低，70%O2+30%CO2和60%O2+40%CO2處理分別在4 d和6 d時(shí)菌落才開(kāi)始擴(kuò)展并出現(xiàn)孢子，10 d后增長(zhǎng)速率趨于平緩。12 d時(shí)ck、90%O2+10%CO2、80%O2+20%CO270%O2+30%CO2和60%O2+40%CO2處理的孢子量和菌落直徑分別為145.03×106，89.99×106，74.68×106，47.63×106，31.37×106個(gè)和4.68，3.29，2.63，2.05，1.58 cm，且差異均達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。
2.4 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)孢子電導(dǎo)率和內(nèi)容物釋放量的影響
隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理枝孢菌的電導(dǎo)率均呈上升趨勢(shì)（圖4a）。ck處理初期增速較快，8 d后趨于平穩(wěn)；70%O2+30%CO2、80%O2+20%CO2和90%O2+10%CO2處理在10 d后達(dá)到平衡；而60%O2+40%CO2處理初期迅速增加，10 d后仍未進(jìn)入穩(wěn)定期，表明高CO2對(duì)枝孢菌的細(xì)胞膜通透性造成了嚴(yán)重的破壞。就整體而言，各處理組電導(dǎo)率隨CO2濃度的升高而增大。
在整個(gè)處理期間，各處理枝孢菌的孢子內(nèi)容物釋放量都呈上升趨勢(shì)，且在不同的時(shí)間進(jìn)入平衡期（圖4b）。80%O2+20%CO2、90%O210%CO2和ck處理前期迅速增加，8 d時(shí)基本達(dá)到平衡；而60%O2+40%CO2和70%O2+30%CO2處理孢子產(chǎn)生時(shí)間較晚，而初始內(nèi)容物釋放量及增長(zhǎng)速率顯著高于其余各組。12 d時(shí)ck、90%O2+10%CO2、80%O2+20%CO2、70%O2+30%CO2和60%O2+40%CO2處理的吸光值分別為0.192，0.201，0.213，0.235和0.243。
圖3不同處理對(duì)菌落直徑（a）、孢子量（b）的影響
圖4不同處理對(duì)電導(dǎo)率（a）、內(nèi)容物釋放（b）的影響
2.5 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌后續(xù)生長(zhǎng)曲線的影響
為研究O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)枝孢菌生長(zhǎng)能力的影響，對(duì)處理8 d的枝孢菌生長(zhǎng)曲線進(jìn)行了測(cè)定（圖5）。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，所有處理的生長(zhǎng)曲線基本呈S型增加，初期緩慢增加，然后迅速增加，最后進(jìn)入穩(wěn)定期。ck處理的菌絲干重顯著高于其余處理組（P＜0.05），且在22 h時(shí)進(jìn)入對(duì)數(shù)期，而70%O2+30%CO2、80%O2+20%CO2和90%O2+10%CO2處理在26 h進(jìn)入對(duì)數(shù)期，60%O2+40%CO2處理在32 h進(jìn)入對(duì)數(shù)期，表明O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)處理延緩了枝孢菌的后續(xù)生長(zhǎng)能力。68 h時(shí)60%O2+40%CO2、70%O2+30%CO2、80%O2+20%CO2、90%O2+10%CO2和ck處理的菌絲干重分別為35.1，52.4，57.5，64.8，91.2 mg。
圖5不同處理對(duì)枝孢菌后續(xù)生長(zhǎng)曲線的影響
2.6 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)SOD和CAT活性的影響
SOD和CAT是清除生物機(jī)體自由基的關(guān)鍵酶，就總體而言，隨著CO2濃度的增加，各處理SOD和CAT活性逐漸降低（圖6）。在12 d時(shí)，60%O2+40%CO2、70%O2+30%CO2、80%O2+20%CO2、90%O2+10%CO2和ck處理SOD平均活性分別為1 145，1 630，1 878，2 038，2 649 U，說(shuō)明高CO2降低了枝孢菌的活性氧清除能力。
2.7 O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)對(duì)PG和PMG活性的影響
在整個(gè)處理過(guò)程中，PG和PMG活性基本呈下降趨勢(shì)，且隨CO2濃度的增加而降低（圖7）。整個(gè)貯藏期間，ck、90%O2+10%CO2、80%O2+20%CO2、70%O2+30%CO2和60%O2+40%CO2處理的PG和PMG的平均活性分別為2.25，1.64，1.13，1.01，0.88 U和0.83，0.58，0.49，0.37，0.30 U，表明高CO2可以抑制PG和PMG的活性，降低枝孢菌的致病性。
圖6不同處理對(duì)SOD（a）和CAT（b）活性的影響
圖7不同處理對(duì)枝孢菌PG（a）和PMG（b）的影響
3討論
研究指出，氣調(diào)處理能有效減輕果蔬采后病害的發(fā)生，如10%O2+10%CO2氣調(diào)處理能顯著降低拮抗酵母對(duì)甜櫻桃青霉病和黑斑病的發(fā)生；7.5%～30%CO2和1.5%O2能夠顯著降低芹菜的腐爛，1%或2%O2結(jié)合2%或4%CO2可明顯抑制芹菜黑徑病的危害。本研究采用O2/CO2氣體處理方式，顯著降低了枝孢菌的活力和再生長(zhǎng)能力，并降低其致病能力，表現(xiàn)出很好的抑菌效果。
Amanatidou等研究表明，高O2促進(jìn)好氧微生物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生；Farber指出，CO2可以直接抑制微生物內(nèi)酶的作用或降低酶的反應(yīng)速率，這與本研究O2/CO2氣調(diào)處理降低枝孢菌SOD和CAT活性的結(jié)果一致。本研究中氣調(diào)處理的枝孢菌孢子電導(dǎo)率及內(nèi)容物釋放量顯著超過(guò)對(duì)照組，可能與O2/CO2氣調(diào)處理?yè)p傷枝孢菌活性氧清除系統(tǒng)，導(dǎo)致生物膜中脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+等離子外流有關(guān)，菌絲內(nèi)部存在大量空腔也證實(shí)了這一點(diǎn)（圖2）。
Wszelaki等研究指出，高O2對(duì)離體灰葡萄孢菌生長(zhǎng)的抑制無(wú)后續(xù)效應(yīng)，而本試驗(yàn)處理8 d后，枝孢菌的生長(zhǎng)曲線結(jié)果與此相反，表現(xiàn)出一定的后續(xù)效應(yīng)。因此，O2/CO2氣調(diào)可更好的控制果蔬貯藏過(guò)程中枝孢菌的危害。本課題組的前期研究表明，西蘭花在0，10，20℃時(shí)，適宜的O2/CO2氣調(diào)氣體比例分別為60%O2+40%CO2、50%O2+50%CO2和40%O2+60%CO2，耐受的CO2濃度很高，這與高O2能緩解CO2傷害有關(guān)。本研究使用的CO2比例最高為40%，就能達(dá)到很好的抑菌效果，表明O2/CO2氣調(diào)在果蔬保鮮及抑菌方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
4結(jié)論
綜上所述，O2/CO2主動(dòng)自發(fā)氣調(diào)可降低枝孢菌生長(zhǎng)活力、活性氧清除能力和致病能力，并對(duì)處理后的生長(zhǎng)產(chǎn)生后續(xù)效應(yīng)，且隨著CO2濃度的升高，抑菌效果逐漸增強(qiáng)。該研究為O2/CO2氣調(diào)過(guò)程中果蔬采后病害的控制提供了理論依據(jù)。
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