貼壁細(xì)胞是目前細(xì)胞培養(yǎng)中的主要類型,它們需要吸附在支持物表面,依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長、繁殖。有時(shí)候我們會(huì)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞無法貼壁,這是什么原因引起的呢?
T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞貼壁是適應(yīng)環(huán)境的一種反應(yīng),密度大于培養(yǎng)基的細(xì)胞會(huì)沉降在底面上,如果細(xì)胞要生存必定得改善這個(gè)環(huán)境,分泌細(xì)胞外基質(zhì),改善底面結(jié)構(gòu),然后很自然就貼附在底面上了。密度小于水的細(xì)胞會(huì)漂浮在液面上,所以不可能貼在底面上,但是如果將培養(yǎng)液加滿,使細(xì)胞能夠與細(xì)胞培養(yǎng)方瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。如果細(xì)胞出現(xiàn)不貼壁的情況,可以從以下幾個(gè)方面分析:
T175細(xì)胞培養(yǎng)瓶
1、細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間:消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的;若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷,使細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。
2、缺少貼壁因子:血清中含有促貼壁因子,而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子,細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。
3、支原體或細(xì)菌的污染。
4、培養(yǎng)液配置、儲(chǔ)存不當(dāng),如pH值過堿,Gln量太少等原因。
5、復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好,已經(jīng)老化,失去貼附性。
6、接種細(xì)胞數(shù)目太少,無法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。
7、復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢,復(fù)蘇過程不當(dāng)。
1000ml血清培養(yǎng)基瓶
綜合來看,貼壁細(xì)胞出現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象主要是以上幾個(gè)方面的原因。此外,塑料材質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶如果未經(jīng)過表面TC處理,也會(huì)影響細(xì)胞的貼壁性能。
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