益生菌是指對宿主有益的活的微生物，它與營養(yǎng)、健康、疾病和免疫息息相關(guān)。近年來發(fā)現(xiàn)，益生菌通過腸道菌群有效預(yù)防或減輕高脂飲食引起的認(rèn)知障礙和焦慮，通過腸道菌群影響胎盤的形態(tài)發(fā)生、營養(yǎng)轉(zhuǎn)運和胎兒生長。因此，研究腸道菌群結(jié)構(gòu)及代謝產(chǎn)物的變化及規(guī)律，可為益生菌的開發(fā)利用提供理論支撐。類腸膜魏斯氏菌(Weisellasparamesenteroides)屬于厚壁菌門，芽孢菌綱，乳桿菌目，明串珠菌科，能在生物腸道中定植，是一類分布于果蔬、奶酪、泡菜和酒曲等中的乳酸菌。類腸膜魏斯氏菌具有產(chǎn)細(xì)菌素的特性，通過蛻皮激素和胰島素信號通路調(diào)節(jié)果蠅的蛻化及發(fā)育；通過抑制促炎細(xì)胞因子和誘導(dǎo)抗炎介質(zhì)來調(diào)節(jié)免疫，預(yù)防、治療鼠傷寒沙門氏菌感染疾病。類腸膜魏斯氏菌產(chǎn)廣譜抗性物質(zhì)，具有良好的處理魚下腳料的應(yīng)用效果，參與乙醇的生產(chǎn)，且是酮向醇轉(zhuǎn)化過程中的重要生物催化劑。
Pabari等發(fā)現(xiàn)類腸膜魏斯氏菌可以產(chǎn)細(xì)菌素和胞外多糖。食竇魏斯氏菌具有提高愛拔益加(AA)肉雞空腸、回腸和盲腸絨毛長度、促進(jìn)體重增長、抑制有害菌生長和促進(jìn)乳酸菌生長的生物學(xué)功能。魏斯氏菌可產(chǎn)生β-葡糖苷酶，促進(jìn)纖維素降解。有研究報道，魏斯氏菌能提高生長豬的生長性能和免疫應(yīng)答。目前已發(fā)表的研究，主要集中在抗菌和產(chǎn)細(xì)菌素及胞外產(chǎn)物等方面，試驗動物多為果蠅、雞和小白鼠等，有關(guān)該菌對大型試驗動物，如豬的生長、糞菌多樣性和代謝產(chǎn)物的影響的研究報道較少。因此，為了更好地研究和利用云南省地方豬，進(jìn)一步明確類腸膜魏斯氏菌在動物體內(nèi)的試驗效果，本研究選用含迪慶藏豬血緣50%的地方豬雜交豬為試驗對象，旨在探究類腸膜魏斯氏菌在地方豬雜交豬體內(nèi)的生物學(xué)特征，明確其對豬的生長性能、糞便中代謝產(chǎn)物和糞菌結(jié)構(gòu)變化的影響，以期為類腸膜魏斯氏菌的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗材料
試驗所用類腸膜魏斯氏菌由本實驗室從迪慶藏豬消化道中篩選分離所得，經(jīng)過菌落形態(tài)學(xué)和16S rDNA鑒定為類腸膜魏斯氏菌。
1.2試驗動物及設(shè)計
試驗以雜交選育豬(含杜洛克25%、迪慶藏豬50%和太湖豬25%的血緣)為試驗動物，選取(228±2)日齡、體重為(95.84±10.05)kg的去勢育肥豬20頭，按照完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，隨機(jī)分為2組(試驗組和對照組)，每組2個重復(fù)，每個重復(fù)5頭豬。
1.3試驗飼糧及飼養(yǎng)管理
基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平參考本課題組前期研究，動物飼養(yǎng)試驗在云南省種豬質(zhì)量檢驗測試中心測定舍內(nèi)進(jìn)行，試驗開始前打掃與消毒空舍，飼養(yǎng)全過程采用自由采食和自由飲水，其他按照管理程序進(jìn)行。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加類腸魏斯氏菌的試驗飼糧(添加量為107CFU/g)，添加量參考乳酸菌類其他學(xué)者研究結(jié)果。預(yù)試期7 d，正試期22 d。
1.4樣品采集
正試期開始和結(jié)束當(dāng)日進(jìn)行稱重(禁食12 h)，豬全自動采食測定系統(tǒng)(ACEMO64)用于記錄試驗豬只采食情況。試驗結(jié)束后計算平均日增重、平均日采食量和料重比，在試驗結(jié)束當(dāng)天每個重復(fù)隨機(jī)選擇3頭豬，采集剛排泄豬糞便的中間部分，迅速放入液氮中，-80℃保存，用于后續(xù)分析。
1.5 16S rRNA PCR擴(kuò)增、高通量測序和數(shù)據(jù)分析
采用試劑盒提取法提取樣品的總DNA(Omega Bio-Tek,Norcross,美國)，使用NanoDrop2000檢測總DNA樣品的濃度和純度，PCR擴(kuò)增V3～V4可變區(qū)[引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)]，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，純化，QuantusTMFluorometer檢測定量，采用Illumina公司的Miseq PE300平臺測序、質(zhì)控和拼接后，構(gòu)建文庫。通過I-Sanger云平臺數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析。
1.6代謝組學(xué)分析
樣品處理后，通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(LC-MS,ABSCIEX,UPLC-TripleTOF)進(jìn)行檢測，通過Progenesis QI(Waters corporation,Milford,美國)軟件進(jìn)行代謝物注釋，最終獲得代謝物列表和數(shù)據(jù)矩陣，結(jié)合t檢驗和通過正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)篩選差異變量(VIP)，從而篩選出差異的目標(biāo)代謝物，并對其生物學(xué)信息進(jìn)行挖掘。
1.7數(shù)據(jù)分析
采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。
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