2.3 SLM對(duì)PEDV增殖的抑制作用
如圖3A所示，為PEDV感染和SLM作用示意圖，為了進(jìn)一步確認(rèn)SLM對(duì)PEDV增殖的影響，使用RT-qPCR、病毒滴度測(cè)定、Western blot、IFA多種技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。Western blot和RT-qPCR結(jié)果顯示，與PEDV感染組相比，SLM能夠顯著降低PEDV N蛋白和N基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄(P<0.01)
(圖3B和C)。病毒滴度的結(jié)果顯示，與PEDV感染組相比，SLM可以顯著降低病毒含量(P<0.01)(圖3D)。IFA的結(jié)果表明，PEDV感染組的綠色陽(yáng)性細(xì)胞最多，而隨著SLM含量的增加，陽(yáng)性細(xì)胞逐漸減少(圖3E);與PEDV感染組相比，不同濃度SLM(0.05、0.5、5μmol·L-1)處理組的陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著降低，且差異極顯著(P<0.001)(圖3F)。
2.4 SLM對(duì)PEDV復(fù)制周期的影響
2.4.1 SLM不能直接作用于PEDV SLM和PEDV直接作用的方式如圖4A所示，RT-qPCR測(cè)定各組的核酸含量并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果如圖4B所示，分別比較SLM與PEDV作用不同時(shí)間段后的結(jié)果，SLM處理組與PEDV感染組的病毒mRNA水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著(P>0.05)，表明SLM不能直接作用于PEDV。
A.病毒感染和藥物作用示意圖;B.RT-qPCR檢測(cè)PEDV感染和SLM處理后N基因水平
圖4 SLM對(duì)PEDV病毒粒子的影響
2.4.2 SLM不影響PEDV吸附SLM作用于PEDV吸附階段的過程如圖5A所示，在病毒吸附的同時(shí)加入SLM，孵育相應(yīng)的時(shí)間后SLM處理組與PEDV感染組相比，PEDVN基因mRNA水平?jīng)]有顯著差異(P>0.05)(圖5B)，表明SLM對(duì)PEDV的吸附?jīng)]有顯著影響。
A.病毒感染和藥物作用示意圖;B.RT-qPCR檢測(cè)PEDV吸附階段加入SLM后PEDV N基因水平
圖5 SLM對(duì)PEDV吸附Vero細(xì)胞的影響
2.4.3 SLM不影響PEDV入胞如圖6A所示，在PEDV入侵細(xì)胞階段加入SLM，孵育相應(yīng)的時(shí)間后SLM處理組與PEDV感染組相比，細(xì)胞內(nèi)PEDVN基因mRNA水平無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖6B)，表明SLM對(duì)PEDV的入胞沒有顯著影響。
A.病毒感染和藥物作用示意圖;B.RT-qPCR檢測(cè)PEDV入胞階段加入SLM后PEDV N基因水平
圖6 SLM對(duì)PEDV入侵Vero細(xì)胞的影響
2.4.4 SLM抑制PEDV復(fù)制階段SLM作用于PEDV復(fù)制階段的過程如圖7A所示，在病毒復(fù)制階段加入SLM，孵育4或6 h后，SLM處理組與PEDV感染組之間PEDVN基因的mRNA水平差異顯著(P<0.05)(圖7B)，病毒滴度的結(jié)果表明在病毒復(fù)制階段加入SLM可以顯著降低細(xì)胞內(nèi)病毒粒子的數(shù)量(P<0.05)(圖7C)，以上結(jié)果均表明SLM影響PEDV的復(fù)制階段。
A.病毒感染和藥物作用示意圖;B.RT-qPCR檢測(cè)PEDV復(fù)制階段加入SLM后PEDV N基因水平;C.病毒粒子釋放水平
圖7 SLM對(duì)PEDV在Vero細(xì)胞中復(fù)制的影響
2.4.5 SLM不影響PEDV釋放如圖8A所示，在PEDV釋放階段加入SLM，孵育相應(yīng)時(shí)間后SLM處理組與PEDV感染組之間的病毒含量沒有顯著差異(P>0.05)(圖8B)，表明SLM對(duì)PEDV的釋放沒有顯著影響。
A.病毒感染和藥物作用示意圖;B.RT-qPCR檢測(cè)PEDV釋放階段加入SLM后N基因水平
圖8 SLM對(duì)PEDV從Vero細(xì)胞釋放的影響
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