高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome，HP-PRRS)，俗稱“高致病性豬藍耳病”，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)變異株引起的一種急性高致死性傳染病。HP-PRRSV與PRRSV間最主要的差異是HP-PRRSV在NSP2蛋白中存在30個氨基酸的缺失，臨床主要表現(xiàn)體溫高、發(fā)病率高和死亡率高”三高”特點，自2006年以來HP-PRRS給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大損失。
該病無特效治療藥物，主要靠疫苗接種來預(yù)防控制。我國用于預(yù)防HP-PRRS的疫苗，活疫苗占75%，主要由于活疫苗具有免疫力堅強、疫苗免疫產(chǎn)生期快、免疫效果好、免疫期長等優(yōu)點。病毒含量和免疫原性是活疫苗的主要指標，我國獸用疫苗行業(yè)主要以轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)方式生產(chǎn)疫苗，批次間差異大，疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定是疫苗廠家共性問題，要保證疫苗質(zhì)量穩(wěn)定，必須進行疫苗生產(chǎn)工藝優(yōu)化，本研究主要通過篩選并建立種子庫，優(yōu)化Marc-145細胞培養(yǎng)條件，優(yōu)化Marc-145細胞微載體培養(yǎng)對高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗生產(chǎn)工藝進行研究。力求優(yōu)化工藝，為其它產(chǎn)品工藝提供有效參考。通過細胞傳代、接毒、效力測定等實驗，篩選出適應(yīng)性好的細胞株及種毒，成功建立了細胞庫、種毒庫，凍存種細胞18株、種毒15株，經(jīng)鑒別鑒定后安全性和純凈性良好，回歸實驗顯示種細胞和種毒的優(yōu)勢有可復制性，達到篩選和建庫的目的，為生產(chǎn)工藝優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。
通過比對試驗、正交實驗，分析各因素對轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)工藝的影響，證明DMEM(高糖)、含8%-10%FBS的生長液更適合Marc-145細胞生長，轉(zhuǎn)速10次/h、溫度37.5℃、2%FBS維持液、Ph7.3的方案更適合病毒增殖。在適當范圍調(diào)節(jié)生產(chǎn)方案使生產(chǎn)更穩(wěn)定，優(yōu)化效果明顯。利用生物反應(yīng)器，通過微載體培養(yǎng)技術(shù)，成功的進行了Marc-145培養(yǎng)和接毒，結(jié)果顯示最佳細胞接種密度為2.6×10~5/ml，微載體培養(yǎng)細胞密度比轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)高2.1倍，產(chǎn)毒滴度比轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)高0.46，為大規(guī)模生產(chǎn)技術(shù)升級提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
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