2結(jié)果與分析
2.1苦蕎蛋白對三種有害菌生長的抑制作用
由圖1可知，不同實驗組中腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均呈先上升后下降的趨勢，其中，中(MD)、高(HD)劑量組的苦蕎蛋白在發(fā)酵8 h時達到最大值，而空白組(CK)、酪蛋白組(PC)及低(LD)劑量組的苦蕎蛋白在16 h時達到最大值。另外，在發(fā)酵至32 h時，不同劑量組的苦蕎蛋白中腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均顯著低于CK和PC組(p<0.05)，且上述三種有害菌群的數(shù)量隨苦蕎蛋白濃度的增加而顯著性降低(p<0.05)，同時，酪蛋白組中腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量與空白對照組之間無顯著性差異(p>0.05)。培養(yǎng)至32 h時，低、中、高劑量的苦蕎蛋白組較空白對照組，腸球菌減少了50%、57%、65%，腸桿菌減少了13%、52%、72%，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少了66%、73%、78%;而酪蛋白卻使其分別減少了5%、7%、4%。研究結(jié)果表明，苦蕎蛋白能夠顯著地抑制腸道有害菌(腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌)的生長，與文獻報道的結(jié)論一致。
圖1苦蕎蛋白體外發(fā)酵對三種腸道有害菌生長的影響
注:CK:空白對照組;PC:酪蛋白組;LD:低劑量苦蕎蛋白組;MD:中劑量苦蕎蛋白組;HD:高劑量苦蕎蛋白組;A:腸球菌;B:腸桿菌;C:產(chǎn)氣莢膜梭菌，圖2、圖3同。
2.2苦蕎蛋白對小鼠糞便發(fā)酵液pH的影響
由圖2可知，各實驗組pH變化趨勢均呈下降趨勢，而對照組(CK)卻呈先下降后上升的趨勢，這可能是由于隨著培養(yǎng)時間的增加，其菌群發(fā)生變化，使產(chǎn)酸菌群減少或氨類物質(zhì)增多而導(dǎo)致;另外，當培養(yǎng)至32 h時，其中PC組pH由7.21降到4.72，LD組pH由7.18降到4.68，MD組pH由7.09降到4.35，HD組pH由7.17降到4.33，各組pH下降程度高低為HD>MD>LD>PC>CK。酪蛋白組和不同劑量組的苦蕎蛋白組發(fā)酵液中的pH均低于空白對照組，且與其之間均具有顯著性差異(p<0.05)。在培養(yǎng)結(jié)束時，不同劑量組的苦蕎蛋白組的發(fā)酵液pH與腸道中三種有害菌(腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌)數(shù)量之間存在正相關(guān)關(guān)系，即發(fā)酵液pH越低，腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量越少。由此說明，有害菌生長受到抑制可能是由于腸道菌群發(fā)酵苦蕎蛋白而產(chǎn)生短鏈脂肪酸等酸性物質(zhì)，從而使腸道環(huán)境pH降低，這對于預(yù)防和治療腸道疾病具有重要意義。
圖2苦蕎蛋白體外發(fā)酵對pH的影響
圖3苦蕎蛋白體外發(fā)酵對短鏈脂肪酸的影響注:A:乙酸;B:丙酸;C:丁酸;D:乳酸。
2.3苦蕎蛋白對短鏈脂肪酸的影響分析
由圖3可知，不同劑量的苦蕎蛋白均能促進乙酸、丙酸、丁酸、乳酸的生成，且隨著培養(yǎng)時間的延長，4種短鏈脂肪酸的濃度均顯著性增加(p<0.05)，可能是由于腸道菌群將苦蕎蛋白作為發(fā)酵底物產(chǎn)生短鏈脂肪酸等有機酸。當培養(yǎng)至32 h時，中、高劑量的苦蕎蛋白組(MD、HD)較0 h使乙酸濃度增加了7.29、8.94倍，丙酸濃度增加了25.47、33.77倍，丁酸濃度增加了23.60、27.34倍，乳酸濃度增加了22.61、25.55倍(酪蛋白組(PC)使其濃度分別增加了6.73、27.60、22.93、20.70倍)，此結(jié)果與方建東等研究結(jié)論一致。在培養(yǎng)結(jié)束時，不同劑量組的苦蕎蛋白中乙酸、丙酸、丁酸及乳酸與對照組之間均具有顯著性差異(p<0.05)，且中、高劑量組的苦蕎蛋白對短鏈脂肪酸(乙酸、丁酸、乳酸)的促進作用顯著高于酪蛋白，即苦蕎蛋白對短鏈脂肪酸的促進作用優(yōu)于酪蛋白，且高劑量組較低劑量組效果更加顯著，其原因可能是苦蕎蛋白和酪蛋白均能夠被腸道菌群發(fā)酵，而且苦蕎蛋白更有利于被腸道菌群發(fā)酵產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸、乳酸。當培養(yǎng)結(jié)束時，圖3中各組中短鏈脂肪酸的濃度可能與圖2中相對應(yīng)的pH相關(guān)，即短鏈脂肪酸濃度越高，其對應(yīng)的pH越低，從而表明pH的降低可能是通過發(fā)酵代謝產(chǎn)生的短鏈脂肪酸所引起的。
3結(jié)論
本文初步研究了苦蕎蛋白對腸道中三種有害菌(腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌)生長的抑制作用及其機理。結(jié)果表明，苦蕎蛋白對腸道中腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長均具有抑制作用且高于酪蛋白，其中，高劑量的苦蕎蛋白(HD)對三種菌的抑制作用最強，較空白對照組(CK)分別減少了65%、72%和78%(32 h)。不同劑量的苦蕎蛋白可顯著性地促進乙酸、丙酸、丁酸、乳酸濃度的增加，且中、高劑量組的苦蕎蛋白對其促進作用顯著高于酪蛋白(p<0.05)，其中，高劑量組的苦蕎蛋白較對照組分別使乙酸、丙酸、丁酸及乳酸的濃度增加了8.94、33.77、27.34、25.55倍(32 h)。而產(chǎn)生的短鏈脂肪酸進一步使腸道pH降低，且不同劑量苦蕎蛋白組的pH均低于酪蛋白(高劑量組苦蕎蛋白的pH為4.33，而酪蛋白組為4.68)。從而證明了苦蕎蛋白對腸道有害菌的生長具有抑制作用，且這種抑制作用是通過促進腸道中短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，進而降低腸道的pH。
綜上所述，苦蕎蛋白是可能通過促進乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸的生成，從而降低腸道的pH來抑制腸道有害菌(腸球菌、腸桿菌及產(chǎn)氣莢膜梭菌的)的生長。
苦蕎蛋白對腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌生長抑制作用及機理（一）
苦蕎蛋白對腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌生長抑制作用及機理（二）
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