耐藥菌的出現(xiàn)和傳播導致全世界范圍內(nèi)由細菌感染引起的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)不斷增多。2016年，世界衛(wèi)生組織制定了一份除結核分支桿菌外的耐藥菌優(yōu)先清單，其中較為重要的臨床優(yōu)先級細菌包括耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌以及耐碳青霉烯和三代頭孢菌素的腸桿菌科細菌。2008年出現(xiàn)的新德里金屬-β-內(nèi)酰胺酶(New DelhiMetallo-β-lactamase,NDM-1)是一種重要的碳青霉烯酶，可以水解包括碳青霉烯類抗生素在內(nèi)的絕大部分β-內(nèi)酰胺類抗生素，導致耐藥菌引起的感染難以治療。研究開發(fā)有效的NDM-1酶抑制劑與β-內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)用是治療NDM-1陽性菌感染的有效途徑之一。雖然目前臨床上已有多種β-內(nèi)酰胺酶抑制劑投入使用，如克拉維酸、舒巴坦等，但仍沒有針對NDM-1的酶抑制劑投入使用。因此，開發(fā)新型安全有效的NDM-1酶抑制劑具有十分重要的意義。
去甲澤拉木醛是一種從雷公藤中提取的三萜烯化合物，在雷公藤中的含量較高，具有抗炎、免疫抑制和抗腫瘤活性。去甲澤拉木醛能夠顯著降低動脈粥樣硬化，還可以阻斷典型和非典型TGF-β信號通路，抑制三陰性乳腺癌細胞入侵。但并沒有去甲澤拉木醛作為抗生素佐劑的報道，因此本研究針對去甲澤拉木醛作為抑制NDM-1活性的美羅培南佐劑展開研究。
本研究通過頭孢硝噻吩水解試驗，從天然化合物庫中篩選獲得了一種NDM-1酶抑制劑去甲澤拉木醛，其可有效抑制NDM-1的活性。通過棋盤法最小抑菌濃度試驗證明了去甲澤拉木醛與碳青霉烯類抗生素美羅培南有良好的協(xié)同抑菌效果，通過生長曲線和殺菌曲線試驗證明了去甲澤拉木醛與美羅培南的協(xié)同殺菌效果。進一步通過大蠟螟感染模型驗證了去甲澤拉木醛可有效增強美羅培南的體內(nèi)治療效果。
圖為去甲澤拉木醛聯(lián)合美羅培南對NDM-1臨床分離株E.coli ZJ487的生長曲線試驗結果
圖為去甲澤拉木醛聯(lián)合美羅培南對NDM-1臨床分離株E.coli ZJ487的殺菌曲線試驗結果
生長曲線試驗
將過夜培養(yǎng)的大腸桿菌E.coli ZJ487轉(zhuǎn)接到新的LB培養(yǎng)基中，待OD600nm至0.1～0.3，分裝至50mL離心管中，同時加入不同濃度去甲澤拉木醛使其終濃度為0、8、32、128μg/mL，37℃，180rpm/min連續(xù)培養(yǎng)，每隔1h測定其在OD600nm的吸光值，記錄并繪制成曲線。
結論：低于128μg/mL的去甲澤拉木醛對大腸桿菌E.coli ZJ487的生長幾乎沒有影響。
4.殺菌曲線試驗
對于大腸桿菌E.coli ZJ487，設置陽性對照、單獨美羅培南(4μg/mL)、單獨去甲澤拉木醛(64μg/mL)、聯(lián)合處理組；每組菌量均為5×105
CFUs，37℃靜置培養(yǎng)。在0、4、8、12、24h時間點分別取出樣品稀釋不同倍數(shù)涂板，24h后統(tǒng)計菌落數(shù)量并記錄。
結論：去甲澤拉木醛與美羅培南聯(lián)合使用可在24h內(nèi)完全殺滅NDM-1陽性臨床分離株E.coli ZJ487。
結論：25mg/kg去甲澤拉木醛聯(lián)合1mg/kg美羅培南可將美羅培南的保護效果從50％提高至70％，顯著高于對照組或單獨去甲澤拉木醛治療。
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