嗜熱四膜蟲Tetrahymenathermophila是一種單細(xì)胞真核生物[1]，隸屬于纖毛門寡膜綱膜口目四膜蟲科四膜蟲屬。嗜熱四膜蟲被廣泛用于污染物毒理學(xué)研究的模式生物，近年來常常被用作評估生態(tài)毒性以及生態(tài)風(fēng)險評估，以超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)等抗氧化相關(guān)酶作為觀察指標(biāo)用以探究毒物對嗜熱四膜蟲的影響?；蚪M學(xué)研究表明四膜蟲和人類基因有較高程度的相似性，因此以四膜蟲作為分子生物學(xué)研究對象，探明藥物或者毒物對高等生物作用機理有較為可靠的理論依據(jù)。有研究用抗菌劑三氯生(triclosan，TCS)和三氯卡班(triclocarban，TCC)干預(yù)四膜蟲，發(fā)現(xiàn)TCS和TCC在環(huán)境相關(guān)濃度下均可干擾嗜熱四膜蟲的抗氧化機制，分別表現(xiàn)為SOD、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(GST)的活力增加，LDH活力的降低[2]。還有研究抗紫外濾光片的作用，以四膜蟲為對象觀測其細(xì)胞內(nèi)SOD、GPx抗氧化酶的活性[3]。課題組基于四膜蟲這種模式生物特點，利用竹節(jié)參、六味地黃丸、金貴腎氣丸等具有補益作用的單味藥物以及方劑，對嗜熱四膜蟲生長曲線、氧化酶及其相關(guān)基因進行研究[4-5]。
目的：以經(jīng)典方當(dāng)歸補血湯對四膜蟲生長曲線和抗氧化酶基因的作用探討篩選抗氧化藥物的新方法。方法：將不同劑量的當(dāng)歸補血湯接種于嗜熱四膜蟲的培養(yǎng)液中，以無菌蒸餾水為空白對照，觀察嗜熱四膜蟲的生長曲線，另外，對上述不同培養(yǎng)液中的嗜熱四膜蟲采用Real Time-PCR法測定嗜熱四膜蟲體內(nèi)的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GPx4)、硫氧還蛋白還原酶(Thioredoxin reductases，TxnRd2)的基因表達。結(jié)果：當(dāng)歸補血湯干預(yù)組生長曲線與空白組相比有明顯的提高。與空白組相比，嗜熱四膜蟲的GPx4、TxnRd2基因表達均顯著升高。結(jié)論：當(dāng)歸補血湯能夠明顯改善四膜蟲生長曲線，促進GPx4、TxnRd2基因mRNA表達，提示生物體生長曲線可能與抗氧化酶基因表達有關(guān)。
當(dāng)歸補血湯對四膜蟲生長曲線的影響
與空白組比較，當(dāng)歸補血湯能夠明顯影響四膜蟲生長曲線。由圖1可觀察到，15h后四膜蟲的生長量達到平臺期，隨著藥物濃度的增加，四膜蟲平臺期數(shù)量明顯提高。
圖1當(dāng)歸補血湯對四膜蟲生長曲線的影響
實驗結(jié)果表明當(dāng)歸補血湯對嗜熱四膜蟲生長曲線可能是通過影響GPx-4、TxnRd2基因表達來得以實現(xiàn)。目前對抗氧化藥物的篩選一般利用動物模型或者建立相應(yīng)的細(xì)胞模型，通過檢測血液、組織及細(xì)胞中抗氧化酶的含量達到篩選中藥以及活性部位的目的。
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