本實驗將以上兩組不同的血清對Sp2/0—Ag14細胞進行培養(yǎng)，通過測定細胞在培養(yǎng)過程中的生長曲線，得出細胞在不同時期的生長密度并以此為依據(jù)來判斷不同血清培養(yǎng)的細胞生長效果。
生長曲線包括三個時期：滯留期：此期為分種后的初期，不分裂繁殖，細胞數(shù)目不增加，甚至略減，一般需24～96小時，指數(shù)期：這是細胞繁殖的旺盛期，一般為3～5天有時也把它叫潛伏期，平臺期：此時細胞已達飽和濃度，停止生長繁殖，要及時分種傳代，否則將逐漸衰亡[2]。
在測定細胞生長曲線的同時，取細胞達到最大濃度前的細胞數(shù)與達到這一數(shù)量所需的時間計算出細胞的倍增時間[3]，這種方法相對于細胞計數(shù)法[4]來說，能有效的減少實驗誤差對實驗結果的影響，從而使獲得的數(shù)據(jù)更加客觀，可靠。
細胞倍增時間法
細胞倍增時間的測定：按生長曲線計算細胞的倍增時間。取細胞峰值前一天計的得數(shù)（Y），接種細胞數(shù)（X），及生長時間（T）計算。
倍增時間=T/A A=log2Y/X[6]
步驟
將3%谷氨酰胺和1.1%丙酮酸鈉按1%比例加入RPMI 1640培養(yǎng)液中，用7.5%碳酸氫鈉調培養(yǎng)液的PH值為7.2-7.4。取Sp2/0-Ag14種細胞一瓶,用彎頭吸管反復吹打培養(yǎng)瓶細胞面，制成細胞懸液,分種到兩個100ml培養(yǎng)瓶中，9ml培養(yǎng)液/瓶，分別加入兩組牛血清（10%）1ml，放入5%二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱擰松瓶蓋進行開放式培養(yǎng),對細胞進行計數(shù),待細胞濃度達到104/ml時將細胞接種至96孔板中，每隔24h計數(shù)一次,連續(xù)計數(shù)一周，紀錄實驗數(shù)據(jù)[5]。細胞的最大增值濃度不低于106/ml。將記錄的實驗數(shù)據(jù)匯總，繪制出細胞生長曲線，根據(jù)公式計算出細胞倍增時間。
Sp2/0-Ag14細胞生長曲線圖
采用細胞生長曲線測定法，雖然也要進行細胞計數(shù)，但細胞生長曲線的測定是對細胞生長趨勢的測定，實驗產生的誤差對實驗結果的影響較小，從而使結果更加客觀，精確。實驗結果證明：采用14日齡采血牛血清進行細胞培養(yǎng)優(yōu)于采用3月齡血清；采用細胞倍增時間法進行細胞培養(yǎng)效果評價要優(yōu)于細胞計數(shù)法。
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