摘要為探明鐵皮石斛超微飲片與傳統(tǒng)飲片對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響，明確中藥超微飲片的優(yōu)越性，選用生長(zhǎng)受鐵皮石斛影響明顯的2種微生物，通過液體培養(yǎng)比濁法研究了鐵皮石斛超微飲片與傳統(tǒng)飲片的作用效果。結(jié)果表明，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片對(duì)釀酒酵母的生長(zhǎng)都有促進(jìn)作用，且超微飲片的效果優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，其中0.08～0.12 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)釀酒酵母生長(zhǎng)的促進(jìn)效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平。鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)都有抑制作用，并且超微飲片的效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片，其中0.04～0.08 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平，0.10 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比沒有顯著性差異。可見，超微飲片的有效物質(zhì)浸出率高于傳統(tǒng)飲片，超微技術(shù)有利于中藥成分的溶出。
鐵皮石斛（Dendrobium officinale）為多年生草本植物，是一種名貴的中藥材，有“除痹下氣，補(bǔ)五臟虛勞贏瘦，強(qiáng)陰，久服厚腸胃輕身延年”的功效。研究表明，鐵皮石斛對(duì)假絲酵母（Candida albicans）、釀酒酵母（Saccharomyces cere-visiae）、德巴利酵母（Debaryomyces hansenii）的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用，對(duì)保加利亞乳桿菌（Lactobacillus delbrueckii）和枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）等有益細(xì)菌的生長(zhǎng)也具有明顯的促進(jìn)作用，能夠抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌等致病菌的生長(zhǎng)，但是對(duì)綠膿桿菌、嗜熱鏈球菌、產(chǎn)氣桿菌、地衣芽胞桿菌的生長(zhǎng)沒有明顯的影響。
傳統(tǒng)中藥飲片工序簡(jiǎn)單，臨床使用顯示了極強(qiáng)的生命力，但傳統(tǒng)中藥飲片服用前需臨時(shí)煎煮，使用和攜帶不方便，藥物有效成分煎出率低，藥材利用率低。超微中藥采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)的中藥炮制技術(shù)相結(jié)合，將傳統(tǒng)飲片加工成一種粒徑為微米級(jí)的新型中藥飲片，服用方便。與傳統(tǒng)飲片相比，超微技術(shù)能更好地促進(jìn)中藥材中有效成分的溶出。中藥飲片經(jīng)超微處理后，粒度更細(xì)、勻，藥材成分與溶劑的接觸面積增大，進(jìn)入人體的超微飲片是大部分破壁后的全細(xì)胞成分，因而超微飲片的療效較傳統(tǒng)飲片要高?，F(xiàn)選用鐵皮石斛作用明顯的釀酒酵母和大腸桿菌，研究超微飲片與傳統(tǒng)飲片的作用效果，以探討超微飲片對(duì)中藥藥效的影響。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1菌株。研究證明鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，對(duì)酵母菌的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。本研究選取大腸桿菌和釀酒酵母作為供試菌株，菌株由湖南中醫(yī)藥大學(xué)提供，制成菌懸液，待用。
1.1.2藥物。鐵皮石斛超微粉和常規(guī)細(xì)粉c，由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。
1.1.3培養(yǎng)基。YPD液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)釀酒酵母。牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)大腸桿菌。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1藥液制備。分別稱取適量的鐵皮石斛超微粉和常規(guī)細(xì)粉加入到對(duì)應(yīng)菌種的培養(yǎng)基中，拌勻，達(dá)到所需的濃度，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)的結(jié)果，使用0.04、0.06、0.08、0.10 g/mL等藥物濃度研究對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用，使用0.06、0.08、0.10、0.12 g/mL等藥物濃度研究對(duì)釀酒酵母生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，高壓蒸汽滅菌后，冷卻，待用。
1.2.2超微鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用。分別向已滅菌的2種鐵皮石斛飲片與液體培養(yǎng)基混合液中加入0.1 mL對(duì)應(yīng)的供試大腸桿菌菌液（以加菌液的培養(yǎng)基混合液作為參比），于搖床中37℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)24 h，取樣，測(cè)OD660。
1.2.3超微鐵皮石斛對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。分別向已滅菌的2種鐵皮石斛飲片與液體培養(yǎng)基混合液中加入0.1 mL對(duì)應(yīng)的供試菌菌液（以未加菌液的混合液作為參比），于搖床中28℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)48 h，取樣，測(cè)OD660。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，各分組所得計(jì)量數(shù)據(jù)用平均值表示，用t檢驗(yàn)比較組間均值，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果與分析
2.1鐵皮石斛對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用
由圖1可知，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)均有抑制作用，并且超微飲片的抑制效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片。當(dāng)2種鐵皮石斛飲片的濃度為0.04～0.08 g/mL時(shí)，鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平（P<0.05或P<0.01），而0.10 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制效果優(yōu)于鐵皮石斛傳統(tǒng)飲片，但二者相比沒有顯著性差異（P>0.05）。說明在一定濃度范圍內(nèi)，隨著鐵皮石斛濃度的增加，對(duì)大腸桿菌的抑制作用增強(qiáng)，但當(dāng)濃度達(dá)0.10 g/mL及以上時(shí)，其抑制效果最好。雖然超微飲片的有效成分浸出率比傳統(tǒng)飲片高，但差異不顯著。
2.2鐵皮石斛對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用
由圖2可知，鐵皮石斛超微飲片和傳統(tǒng)飲片在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對(duì)釀酒酵母的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，且超微飲片的效果優(yōu)于傳統(tǒng)飲片。當(dāng)鐵皮石斛濃度為0.08～0.12 g/mL時(shí)，超微飲片對(duì)釀酒酵母生長(zhǎng)的促進(jìn)效果與傳統(tǒng)飲片相比差異達(dá)顯著或極顯著水平（P<0.05或P<0.01），而0.06 g/mL鐵皮石斛超微飲片對(duì)釀酒酵母生長(zhǎng)的促進(jìn)效果強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片，但二者相比沒有顯著性差異（P>0.05）。這說明鐵皮石斛對(duì)釀酒酵母生長(zhǎng)的促進(jìn)作用在一定濃度范圍內(nèi)隨著濃度的升高而增加，由于超微飲片有效成分的浸出率比傳統(tǒng)飲片大，鐵皮石斛濃度達(dá)0.08 g/mL時(shí)就表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。
3結(jié)論與討論
大腸桿菌屬于腸道的正常菌群，鐵皮石斛能夠調(diào)整脾虛便秘小鼠腸道的大腸桿菌數(shù)，鐵皮石斛多糖含量為45%左右，大量研究證明，鐵皮石斛多糖對(duì)大腸桿菌有明顯的抑制作用，鐵皮石斛多糖可能是鐵皮石斛抑制大腸桿菌的主要成分。并且，脾虛便秘造模破壞了腸道細(xì)菌多樣性，經(jīng)2種鐵皮石斛湯劑的治療，可以使腸道的微生態(tài)得到一定的調(diào)整，發(fā)現(xiàn)超微50%量湯劑效果優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑。體內(nèi)和體外試驗(yàn)均證明超微飲片的有效成分浸出率高于傳統(tǒng)飲片。
酵母菌是腸道常見的有益菌，腸道酵母菌的改變也直接關(guān)系著腸道微生態(tài)平衡，七味白術(shù)散通過促進(jìn)腸道酵母菌的繁殖，在治療菌群失調(diào)腹瀉中發(fā)揮著一定的作用。鐵皮石斛能促進(jìn)腸道酵母菌數(shù)量的增加，調(diào)整脾虛便秘小鼠腸道微生態(tài)平衡，對(duì)脾虛便秘的治愈起到一定的效果，并且鐵皮石斛超微飲片對(duì)腸道酵母菌的促進(jìn)作用要強(qiáng)于傳統(tǒng)飲片，說明鐵皮石斛中存在促進(jìn)酵母菌生長(zhǎng)的有效成分，有關(guān)具體成分還有待進(jìn)一步研究。鐵皮石斛超微飲片對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，進(jìn)一步證明中藥超微飲片有利于中藥有效成分的浸出，提高中藥利用度，節(jié)省中藥材。
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