2.3產(chǎn)蛋白酶L.rhamnosus生長曲線測定
由圖4可見，8株篩選菌與2株對照菌在MRS培養(yǎng)基中均表現(xiàn)出良好的生長趨勢。N33、H48、P59、T91和T95這5株菌株生長能力最強，而S21菌株與對照菌LP_6110的生長能力相對較弱，它們的OD600 nm最大值僅為1.638和1.626。綜上所述，可得出8株試驗菌株與2株對照菌株的生長強度排序由強至弱為：N33>P59>T91>T95>H48>N38>S29>LGG>S21>LP_6110。
圖4各試驗菌株在MRS培養(yǎng)基中生長情況
2.4模擬胃酸耐受分析
益生菌具備一定耐酸能力，可在人體腸道環(huán)境中存活并增殖。正常情況下，人體空腹時胃液pH值在2.5左右。因此，本試驗選定pH 2.5分析8株乳桿菌耐酸能力，結(jié)果見表2。
表2 pH2.5時菌株耐受情況
結(jié)果表明，pH 2.5時8株鼠李糖乳酪桿菌存活率范圍介于98.60%~104.50%之間。菌株S29、H48、T95處理3 h（pH 2.5）后存活率幾乎與初始狀態(tài)持平，表現(xiàn)出極強的穩(wěn)定性。而其他試驗菌株的存活率雖有輕微下降，但總體差異并不顯著。8株菌均展現(xiàn)出良好的耐酸能力。對照LGG耐酸能力與上述8株試驗菌株相當(dāng)，而LP_6110處理3 h后的存活率僅為76.48%。這種差異性可能歸因于不同種類乳酸菌在耐酸能力上存在固有差異。張迪等研究植物乳植桿菌（Lactiplantibacillus plantarum，Lpb.plantarum）HOM3201和動物雙歧桿菌乳亞種（Bifidobacterium animalis subsp.lactis，B.lactis）HOM1119在胃腸液3 h存活率均在100%以下，而本試驗的菌株S21和S29高于HOM3201和HOM1119的存活率。
2.5膽鹽耐受能力分析
膽鹽能夠顯著破壞細菌細胞膜的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，從而降低其細胞膜完整性。益生菌在小腸中能否抵抗膽鹽的侵蝕，成為其生存并有效定植的關(guān)鍵前提，進而確保其能持續(xù)地對人體產(chǎn)生積極作用。因此，膽鹽耐受能力已成為評估益生菌功效的重要指標(biāo)。圖5（a）展示了各試驗菌株在0.2%豬膽鹽處理下，分別經(jīng)過0.5 h和3 h后的存活狀況。
結(jié)果表明，在膽鹽環(huán)境下所有測試菌株均受到不同程度的影響。T91菌株表現(xiàn)出最出色的耐受性，3 h存活率高達65.15%，與其他菌株相比具有顯著優(yōu)勢（P<0.05）。此外，N33、N38、T95菌株也表現(xiàn)出較高的膽鹽耐受性，明顯優(yōu)于對照組LGG的27.99%和LP_6110的9.98%。盡管這8株試驗菌株均屬于鼠李糖乳酪桿菌，但在膽鹽耐受性上存在統(tǒng)計學(xué)差異。
圖5各試驗菌株膽鹽耐受能力
2.6產(chǎn)胞外多糖能力分析
在腸道微生物與宿主間的相互作用中，乳桿菌分泌的胞外多糖（EPS）不僅有助于調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，還具有增強免疫力、降低血糖和膽固醇水平等多種益生功能。本試驗以LGG和LP_6110為對照，測定不同菌發(fā)酵上清液中胞外多糖產(chǎn)量。由圖5（b）可見，H48、T91及T95菌株的EPS產(chǎn)量均超過400 mg/L。而S21菌株的EPS產(chǎn)量則相對較低，僅為179.38 mg/mL（P<0.05）。本研究測定的結(jié)果略高于蔣光陽等篩選得到的來源于谷物醋中的菌株，其EPS產(chǎn)量最高僅為344.45 mg/L。
2.7表面疏水性和自聚集能力分析
細菌表面疏水性和自聚集能力與其黏附能力之間存在緊密的關(guān)聯(lián)。這些特性對于益生菌在腸上皮細胞上成功附著和在胃腸道中的穩(wěn)定定植至關(guān)重要。由圖5（c）可見，S21菌株顯著高于其他試驗及對照菌株的表面疏水性。S29、N38以及LP_6110表現(xiàn)出相近的表面疏水能力，均為30%左右，而N33菌株則顯示出最弱的表面疏水性。謝秀明等測定乳酸菌疏水性時選取二甲苯、乙酸乙酯和氯仿溶劑這3種不同的有機相，結(jié)果顯示同一菌株對不同有機相的疏水性也不同。
由圖5（d）可見，S21菌株自聚集能力最強（P<0.05）。觀察活化后的液體MRS培養(yǎng)基可以發(fā)現(xiàn)，S21菌株沉降速度異常迅速，可能與其高度的黏附力或快速的菌體沉降速率有關(guān)。除此之外，N38、T91及T95菌株也表現(xiàn)出較強的自聚集能力，均明顯高于對照菌株LGG和LP_ 6110。
綜上所述，篩選的8株菌株表面疏水能力介于18.55%~86.64%之間，自聚集能力則分布在20.20%~88.09%之間。根據(jù)吳雨晗等提出的劃分標(biāo)準(zhǔn)，S21菌株被歸類為具有高自聚集和高度疏水特性類型，而N33菌株則屬于低自聚集和低疏水性類型。除N33菌株外，其它7株乳桿菌中均具備一定的自聚集和疏水能力。
3討論
試驗對來自于不同年齡母親和月齡母乳喂養(yǎng)的健康嬰兒糞便進行篩選，篩選出的8株乳桿菌均為鼠李糖乳桿菌。以LGG和LP_6110為對照，對本試驗篩選得到8株產(chǎn)蛋白酶乳桿菌的生長性狀和產(chǎn)有機酸能力進行測定。結(jié)果表明，8株菌株均具有良好的生長能力，除S21和LP_6110外其他所有菌株均在0~4 h之間緩慢生長，4 h之后開始飛速生長，并在20 h左右達到穩(wěn)定期，其菌落數(shù)均在1.0×109 CFU/mL以上。
同時，對各試驗菌株進行耐酸能力分析和模擬胃腸液耐受能力分析。結(jié)果表明，8株菌株對pH 2.5的酸環(huán)境均具有很強耐受性，只有LP_6110在酸環(huán)境下菌落數(shù)量減少較多。LIU等考察了18株乳酸菌和雙歧桿菌在pH 2.5環(huán)境中的存活情況，發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳酪桿菌對酸環(huán)境耐受較強，這與本試驗結(jié)果一致。
乳桿菌分泌的EPS可在腸道中促進腸道微生物發(fā)揮益生功能，且EPS在乳制品發(fā)酵生產(chǎn)中可作為高效增稠劑。本試驗篩選得到的產(chǎn)蛋白酶乳桿菌中，T91產(chǎn)EPS能力最強，達442.26 mg/L。其次是H48和T95，產(chǎn)生的EPS含量均超過400 mg/L，菌株S21產(chǎn)量最低，為129.38 mg/mL。本試驗所得EPS產(chǎn)量數(shù)據(jù)相較于蔣光陽等從谷物醋中篩選出的菌株，表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。后者EPS最高產(chǎn)量僅為344.45 mg/L。
通過表面疏水性及自聚集試驗發(fā)現(xiàn)，8株菌株表面疏水能力范圍在18.55%~86.64%之間，自聚集能力20.20%~88.09%之間。S21在所有菌株中自聚集和表面疏水性能力最強；S29、N38、H48則與LP_6110表面疏水能力相差不大，均在30%左右（P<0.05）。
4結(jié)論
本文從16份嬰兒糞便樣品中成功分離出169株乳桿菌，通過透明圈直徑觀察及蛋白水解度測定，初步篩選高產(chǎn)蛋白酶菌株。結(jié)合RAPD圖譜分析，剔除了重復(fù)菌株。對選定菌株進行16S rDNA測序和序列同源性比對，確定8株產(chǎn)蛋白酶乳桿菌均為鼠李糖乳酪桿菌。以LGG和LP_6110為對照，分析8株乳桿菌的益生特性。結(jié)果表明，鼠李糖乳酪桿菌S29、N38、H48、T91、T95具有較強膽鹽耐受能力和較強的胃腸液耐受性，同時具有較強的抑菌能力和較高的胞外多糖產(chǎn)量，其他益生功能也表現(xiàn)優(yōu)異。為益生菌乳制品的開發(fā)提供了參考依據(jù)。
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