3討論
本研究從北極狐的腸道中分離出唾液乳桿菌ZJBF005，并進(jìn)行一系列益生菌所必需的特性評(píng)價(jià)試驗(yàn)，目的是提供有關(guān)北極狐乳酸菌益生菌潛力的基本信息。大多數(shù)益生菌制劑經(jīng)口服后到達(dá)胃腸道，因此菌株對(duì)胃腸液和膽鹽的耐受性是評(píng)判益生菌功能的關(guān)鍵。動(dòng)物胃黏膜分泌的酸有助于消化，是益生菌到達(dá)胃腸道末端的主要問(wèn)題之一。因此，pH被認(rèn)為是微生物作為潛在益生菌的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。在大多數(shù)益生菌耐pH評(píng)價(jià)研究中，通常將pH設(shè)置為2~5，因?yàn)楫?dāng)食物被吞下時(shí)，胃的pH根據(jù)食物成分的不同在3~6變化。許多研究表明，乳酸菌可以在低pH下存活。本試驗(yàn)結(jié)果與這些公認(rèn)的事實(shí)一致，唾液乳桿菌ZJBF005能抵抗低pH為3的環(huán)境并保持相當(dāng)數(shù)量的活菌。在其他研究中也有類似的結(jié)果，認(rèn)為唾液乳桿菌可以在低pH環(huán)境中大量存活。然而，當(dāng)pH降低時(shí)，唾液乳桿菌ZJBF005的活菌數(shù)顯著降低。這與其他研究相似，有報(bào)道稱當(dāng)pH為2時(shí)，乳酸菌的存活數(shù)量顯著減少。乳酸菌在pH低于5的環(huán)境下生存時(shí)，其機(jī)制會(huì)發(fā)生改變，如細(xì)胞膜組成和細(xì)胞密度、中和過(guò)程、多種代謝途徑、質(zhì)子泵、蛋白質(zhì)和DNA損傷修復(fù)等。
胃蛋白酶和胰蛋白酶的抑菌作用是導(dǎo)致胃腸道內(nèi)微生物死亡的兩大因素。結(jié)果表明，唾液乳桿菌ZJBF005能在模擬胃液中存活，但隨著時(shí)間的增加，存活率顯著下降。抗胰蛋白酶的能力是選擇益生菌的另一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)。胰蛋白酶參與脂肪、蛋白質(zhì)和碳水化合物的消化，并通過(guò)胰管在小腸中分泌。唾液乳桿菌ZJBF005可以在模擬腸液中存活，具有一定的抗胰蛋白酶的能力。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，存活率明顯下降，這表明胃蛋白酶和胰蛋白酶的抑菌作用更強(qiáng)。乳酸菌對(duì)人工胃液和人工腸液的耐受活性在許多其他研究中也有報(bào)道。
同樣，對(duì)膽鹽的耐受性也是益生菌的重要特性之一。大多數(shù)細(xì)菌對(duì)膽鹽敏感，在膽鹽存在的情況下無(wú)法生長(zhǎng)，因?yàn)槟扄}具有強(qiáng)大的抗菌活性，主要是通過(guò)觸發(fā)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和損傷DNA。當(dāng)細(xì)菌接觸到膽鹽時(shí)，它們的細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)受到干擾，由于細(xì)胞膜分解，細(xì)菌內(nèi)容物泄漏而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。但是乳酸菌能夠通過(guò)膽汁鹽水解酶來(lái)應(yīng)對(duì)這種不利的條件，把膽鹽解耦成氨基酸和膽固醇。在本研究中，唾液乳桿菌ZJBF005也表現(xiàn)出這種能力，并能抵抗不同濃度的膽鹽，在動(dòng)物胃腸道中具有良好的生存潛力。唾液乳桿菌ZJBF005可在0.2%膽鹽濃度下存活，而在0.3%膽鹽濃度下細(xì)菌的生長(zhǎng)明顯受到抑制。另一項(xiàng)研究也表明，唾液乳桿菌具有良好的抗膽鹽能力。許多其他關(guān)于乳酸菌的研究也顯示了它們?cè)谀扄}中的生存能力。
抑制有害細(xì)菌生長(zhǎng)是益生菌的一個(gè)顯著特性。在本研究中，菌株對(duì)被測(cè)病原體表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。唾液乳桿菌ZJBF005上清液對(duì)沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果較為顯著，而對(duì)大腸桿菌無(wú)抑制作用。實(shí)驗(yàn)室菌株對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌均表現(xiàn)出廣泛的拮抗活性，這與其他研究人員的發(fā)現(xiàn)一致。這些結(jié)果同樣表明，益生菌的代謝產(chǎn)物有抑菌作用。乳酸菌可產(chǎn)生多種抗菌分子，如過(guò)氧化氫、細(xì)菌素、類細(xì)菌素化合物、細(xì)胞外有機(jī)酸等。酸性微環(huán)境進(jìn)一步增強(qiáng)了乳酸菌分泌這些化合物的能力。
本研究中，唾液乳桿菌ZJBF005對(duì)萬(wàn)古霉素具有耐藥性。萬(wàn)古霉素的耐藥性被認(rèn)為是固有的或自然的耐藥菌株，在大多數(shù)情況下，它們的先天阻力來(lái)自于膜的不透水性。因此，根據(jù)以往的研究，萬(wàn)古霉素的耐藥性對(duì)乳酸菌菌株是不可傳播的。對(duì)四環(huán)素和甲氧芐啶的耐藥性與Kim等的發(fā)現(xiàn)一致。對(duì)磷霉素有內(nèi)源性耐藥性，一些具有內(nèi)在抗生素耐藥性的益生菌株在抗生素治療后可能有助于恢復(fù)腸道菌群。這些有益微生物的抗生素耐藥性，無(wú)論是內(nèi)在的還是由于任何突變引起的，并不能說(shuō)明菌株本身存在安全問(wèn)題。
4結(jié)論
本研究從北極狐腸道中分離出一株產(chǎn)酸能力較強(qiáng)的唾液乳桿菌ZJBF005，在體外環(huán)境中表現(xiàn)出良好的益生菌特性和抗菌能力，而且對(duì)臨床使用的多種抗生素不敏感，對(duì)動(dòng)物無(wú)毒副作用。因此，唾液乳桿菌ZJBF005可作為動(dòng)物益生菌制劑的候選菌株。
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