枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、提高飼料轉(zhuǎn)化率和提高動物免疫力等功能，是微生物飼料添加劑的常用菌種。但由于對選育、傳代和保藏等技術(shù)的不重視，導(dǎo)致其性能嚴(yán)重退化，選擇抗逆性強和發(fā)酵效果佳的菌株用于動物飼料添加具有重要意義。該研究觀察了一株枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征，測定了其生長曲線、抗逆性及所發(fā)酵飼料的pH值和幾種消化酶的活力變化，以為其推廣應(yīng)用提供依據(jù)。結(jié)果表明：該株枯草芽孢桿菌具有本種所特有的形態(tài)特征；在37℃、180 r/min條件下培養(yǎng)，無生長延滯期，生長對數(shù)期為0～6 h，生長穩(wěn)定期為6～10 h，生長衰亡期為10 h以后；分別在37℃、70℃、80℃、90℃和100℃的水浴中處理10min后，其存活率差異不顯著（P＞0.05）；在1%～5%的膽鹽中生長存活率均大于100%；在pH值為2的酸性環(huán)境中培養(yǎng)60min，存活率高達58.8%（P≤0.05）；發(fā)酵飼料的pH值隨發(fā)酵時間的延長而明顯降低，而蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶活力顯著升高（P≤0.05）。表明該株枯草芽孢桿菌的飼料學(xué)特性優(yōu)良，是理想的有益微生物飼料添加劑。
畜牧養(yǎng)殖過程對抗生素的不規(guī)范使用，導(dǎo)致了病原微生物耐藥性增強、藥物殘留和食品安全等諸多問題，并最終威脅到人類健康。開發(fā)綠色新型飼用添加劑來替代或減少抗生素的使用將有助于我國畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。微生態(tài)制劑是較理想的飼用抗生素替代品。其能生成乳酸、短鏈脂肪酸和抑菌活性物質(zhì)等有益因子，這不僅有利于胃腸道酸性環(huán)境的形成，還能調(diào)節(jié)動物腸道菌群平衡，促進消化代謝和提高飼料轉(zhuǎn)化率。對豬的飼喂試驗結(jié)果表明，益生菌能明顯提高豬的生長速度，改善飼料的利用率，提高仔豬存活率以及降低腹瀉的發(fā)病率。
枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）是我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的可直接飼喂動物的益生菌菌種之一。近年，人們圍繞枯草芽孢桿菌菌株的篩選、發(fā)酵技術(shù)和添加策略的優(yōu)化等開展了大量的工作。但由于飼料加工過程中的高溫處理（可達90℃以上）和制粒等環(huán)節(jié)對有益微生物有明顯的殺滅作用，動物采食后，益生菌也會被腸道環(huán)境中的胃酸、胃液和膽鹽等抑制甚至殺滅。故選擇抗逆性強、發(fā)酵效果好的有益微生物菌株具有重要意義。鑒于此，本研究對一株枯草芽孢桿菌的飼料學(xué)特性進行了檢測，從而為該菌株的推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗材料與儀器
1.1.1試驗菌株
枯草芽孢桿菌LBD-1菌株由廣東綠百多生物科技有限公司惠贈。
1.1.2主要試劑
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基均購自北京陸橋技術(shù)有限公司；Folin Ciocalteu試劑盒為北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；革蘭氏染色盒購自廣東微生物科技有限公司；人工胃液、膽鹽均參照文獻制備，所用試劑為國產(chǎn)分析純。發(fā)酵所用飼料為正大102小雞料。
1.1.3主要儀器
BC/BD-27生化恒溫培養(yǎng)箱，SPX-250B-Z超凈工作臺，SW-CJ-2F震蕩培養(yǎng)箱，HHS-11-4可見光分光光度計，Bioscreen全自動生長曲線分析儀，密封型手提式粉碎機。
1.2方法
本研究過程主要參照楊鋒等、董尚智等、Alonso等的研究報告及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 8275—2009、SB/T 10317—1999和NY/T912—2004的方法進行。
1.2.1枯草芽孢桿菌菌落形態(tài)觀察和菌體鏡檢將枯草芽孢桿菌LBD-1菌株進行平板劃線后放入37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h和48 h，然后挑取典型菌落菌體進行革蘭氏染色及鏡檢。
1.2.2種子液制備無菌條件下，從菌種保存斜面中挑取1環(huán)菌苔，接入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，即得到細(xì)菌種子培養(yǎng)液。
相關(guān)新聞推薦
1、明永冰川地區(qū)低溫黃桿菌噬菌體生長曲線繪制及生物學(xué)特性（二）
2、微生物群落在應(yīng)對復(fù)合污染時的動態(tài)演替和功能適應(yīng)性