1.4噬菌體宿主范圍
利用實驗室從明永冰川地區(qū)分離、鑒定的菌株進行噬菌體宿主范圍評估，包括Flavobacteriumsp.M YBO1，Pseudomonos sp.M YB05，Paenibaeillussp.MYB09，Chromobacterium sp.MYB10，Pseudom-onossp.MYB15等37株低溫菌。將MYSP03、MYSP08和MYTP08純培養(yǎng)液經0.22 m微孔濾膜過濾后，取100分別與300處于對數(shù)期的上述菌懸液混勻，15℃吸附10min后倒雙層平板，于15℃恒溫培養(yǎng)24～48h，觀察出斑情況。同時以不加宿主菌的噬菌體純培養(yǎng)液和不加噬菌體的宿主菌懸液作陰性對照，實驗重復3次。
1.5噬菌體電鏡形態(tài)觀察
參考《分子克隆實驗指南》第三版，取噬菌體純培養(yǎng)液2L，加入PEG8000至終濃度為10％(w，v)，4℃靜置過夜處理后10000r／min離心收集沉淀，經SM緩沖液重懸后利用氯化銫平衡密度梯度離心純化噬菌體顆粒。磷鎢酸染色后用透射電子顯微鏡H一7650觀察。
1.6物理及化學因素對噬菌體活性影響
1.6.1溫度對噬菌體增殖活性的影響取效價
為1xl0。pfu／mL的噬菌體純培養(yǎng)液100 txL與處于對數(shù)生長期的宿主菌懸液按照MOI=10混勻，15℃溫育吸附10min后補充體積至6mL，分別于4、l0、15、18、20、25o振蕩培養(yǎng)6h，通過雙層平板法測定培養(yǎng)液中的噬菌體效價。同時以不加噬菌體的宿主菌和不加宿主菌的噬菌體作對照，實驗重復3次取平均值。
1.6.2噬菌體的熱穩(wěn)定性研究
取效價為1xl0 pfu／mL的噬菌體純培養(yǎng)液100分別于40、5O、6O、70℃溫育處理30rain，測定不同溫度下樣品中的噬菌體效價。實驗重復3次取平均值。
1.6.3 pH對噬茵體活性的影響
取效價為1xl0’pfu／mL的噬菌體純培養(yǎng)液100 L加入1mL不同pH的緩沖液中(pH 3～11)，室溫下處理1h后測定不同緩沖液中的噬菌體效價。實驗重復3次取平均值。
1.6.4化學試劑敏感性研究
取效價為lxl09pfu／mL的噬菌體純培養(yǎng)液1mL分別經氯仿(25％wt／v，室溫處理10min)、SDS(0.1％wth，50℃處理6min)、Triton)(-100(0.3％wt／v，室溫處理10min)和蛋白酶K(1mg／mL，56℃處理1h)處理，測定不同樣品中的噬菌體效價。
1.7吸附速率的測定
將效價為lxl0 pfu／mL噬菌體純培養(yǎng)液與對數(shù)生長期的宿主菌懸液按照MOI=10混勻，15qC溫育吸附，同時從0時刻開始在2、4、6、8、10、15、20、30min取樣100IxL，13000r／min離心5min，測定上清液中噬菌體效價，同時以不加噬菌體的宿主菌和不加宿主菌的噬菌體作對照。以培養(yǎng)時間為橫坐標，噬菌體效價為縱坐標，繪制吸附速率曲線。
1.8最佳感染復數(shù)的測定
參照Lu等的方法，略有改動。將處于對數(shù)生長期的宿主菌與噬菌體純培養(yǎng)液稀釋為lx10。cfu／mL和1xl0 pfu／mL，按照MOI為O.001、0.01、0.1、1、10和100加人噬菌體純培養(yǎng)液和宿主菌，補充PYGV液體培養(yǎng)基平衡各管體積。l5℃、160dmin振蕩培養(yǎng)3.5h后離心，雙層平板法測定上清液中噬菌體效價，實驗作雙份復管培養(yǎng)取平均值。同時以不加噬菌體的宿主菌和不加宿主菌的噬菌體作對照，測得子代噬菌體效價最高者所對應的MOI即為最佳感染復數(shù)。
1.9一步生長曲線的繪制
將處于對數(shù)生長期的宿主菌稀釋為1xl0cfu／mL，加入噬菌體純培養(yǎng)液使得MOI=10。15℃吸附15min，經13000r／min離心5min，棄上清，用15℃溫育的PYGV新鮮液體培養(yǎng)基洗滌兩次，加入5mL新鮮液體培養(yǎng)基重懸沉淀后迅速置于15℃搖床中160r／min振蕩培養(yǎng)，同時開始計時，自0時刻開始，每隔10min取樣50，利用雙層平板法測定噬菌體效價。各點均作雙份復管取平均值，同時以不加宿主菌的噬菌體和不加噬菌體的宿主菌作對照。以培養(yǎng)時間為橫坐標，測得培養(yǎng)體系中噬菌體的效價為縱坐標，繪制一步生長曲線。
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