2.結(jié)果
2.1異羥肟酸抑制細(xì)胞生長(zhǎng)
MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，異羥肟酸顯著抑制Hela和Siha細(xì)胞生長(zhǎng)，呈時(shí)間和濃度依賴性（見(jiàn)圖1A、1B）。不同濃度（0～5 mmol/L）SAHA處理Hela和Siha細(xì)胞可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.87，P<0.01）；SAHA處理不同時(shí)間（0 h～96 h）可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.78，P<0.01）。經(jīng)直線回歸方程計(jì)算，異羥肟酸作用48、72、96 h時(shí)IC50值分別為14.08、6.78、4.25 mmol/L。
2.2異羥肟酸對(duì)細(xì)胞周期的抑制
異羥肟酸可顯著影響宮頸癌Hela和Siha細(xì)胞的周期分布，使Hela和Siha細(xì)胞G0/G1期比例顯著增加（P=0.001）（見(jiàn)表1）。異羥肟酸降低Hela細(xì)胞S期（P=0.052）和G2/M期（P=0.059）比例，但差異無(wú)顯著性。異羥肟酸降低Siha細(xì)胞S期（P=0.004）和G2/M期（P=0.007）比例，差異有顯著性。
2.3異羥肟酸上調(diào)p53表達(dá)
RT-PCR檢測(cè)顯示異羥肟酸上調(diào)Hela和Siha細(xì)胞的p53mRNA表達(dá)。Westernblot檢測(cè)提示異羥肟酸促進(jìn)Hela和Siha細(xì)胞的p53蛋白表達(dá)（見(jiàn)圖2）。
3.討論
現(xiàn)有大量研究表明，癌癥的發(fā)生與表觀遺傳學(xué)有著密切的關(guān)系，主要包括組蛋白乙酰化、磷酸化、泛素化及DNA甲基化等，其在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中起著重要的作用。Zhang Y等在2004年發(fā)現(xiàn)組蛋白脫乙酰酶抑制劑能增強(qiáng)人鱗癌細(xì)胞放療的敏感性。為了進(jìn)行基因表達(dá)，細(xì)胞必須在組蛋白周圍調(diào)控DNA的螺旋和非螺旋，而這一過(guò)程需在組蛋白乙?；傅膮f(xié)助下方能完成，故HDAC抑制劑可引起組蛋白超乙?；?，從而影響細(xì)胞的基因表達(dá)。HDACs不僅僅能夠催化組蛋白的去乙?；夷軌虼呋渌恍┲匾鞍祝ㄈ鏗sp90、Tubulin等）和轉(zhuǎn)錄因子（p53、STAT1等）的乙?；?HDAC在基因轉(zhuǎn)錄中起重要作用；其可與某些轉(zhuǎn)錄因子（如E2F、Stat3、p53、NF-_B、TFIIE及Rb蛋白）發(fā)生相互作用，從而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。
研究表明p53蛋白羧基端乙?；芤种埔阴；嚢彼崤c泛素酶的結(jié)合并由此引起的降解，而這種單泛素化降解能促進(jìn)p53蛋白的核轉(zhuǎn)運(yùn)。因此p53羧基端乙?；煞€(wěn)定p53在核內(nèi)停滯并影響其在線粒體中的功能表達(dá)。同時(shí)，在正常情況下，乙?；痯53在細(xì)胞中的比例很低。反映出在體內(nèi)具有強(qiáng)去乙?；饔?。早期研究顯示在多種腫瘤細(xì)胞中，p53羧基端乙?；癄顟B(tài)能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄凋亡前效應(yīng)。
Xing J等研究不同濃度SAHA聯(lián)合順鉑（DDP）治療人類宮頸癌SiHa細(xì)胞，抑制和細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期。SiHa細(xì)胞處理后20%的IC50SAHA24小時(shí)，經(jīng)歷了各種劑量的輻射處理。S發(fā)現(xiàn)AHA在化療時(shí)通過(guò)上調(diào)p21和Bax促進(jìn)SiHa信使rna和蛋白質(zhì)的細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。低劑量的SAHA在放療時(shí)通過(guò)Bax上調(diào)和Ku70下調(diào)促進(jìn)SiHa細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞修復(fù)。
本研究證實(shí)異羥肟酸抑制人宮頸癌Hela和Siha細(xì)胞生長(zhǎng)，可呈藥物依賴性地抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。阻滯于G0-G1期的細(xì)胞明顯增多，P53水平顯著上升。異羥肟酸使Hela和Siha細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例顯著增加，推測(cè)異羥肟酸主要通過(guò)影響細(xì)胞周期，使細(xì)胞阻滯于G0/G1期，從而抑制宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。我們觀察到，異羥肟酸對(duì)Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制強(qiáng)于對(duì)Siha細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。這可能因?yàn)镠ela細(xì)胞G0/G1期比例明顯低于Siha細(xì)胞，Hela細(xì)胞中有更多細(xì)胞處于S期和G2/M期，推測(cè)異羥肟酸可能對(duì)增殖旺盛細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用更強(qiáng)。在宮頸癌細(xì)胞株中，HDAC抑制劑可經(jīng)P53途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。HDAC抑制劑可增加P53的轉(zhuǎn)錄，上調(diào)P53基因的表達(dá)，阻止P53蛋白被E6降解。本實(shí)驗(yàn)中觀察到異羥肟酸上調(diào)p53表達(dá)，引起G0/G1期阻滯，可見(jiàn)細(xì)胞凋亡。
新型HDAC抑制劑在小劑量、低氧濃度情況下可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、選擇性凋亡。HDAC抑制劑作為一種新型的靶向抗癌藥，正成為藥物研究的新熱點(diǎn)，臨床應(yīng)用前景廣泛。這類抑制劑可以靶向性地使腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)停滯、分化、凋亡，對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒性，而且其抗腫瘤譜廣，實(shí)用性較強(qiáng)，臨床潛力巨大。
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