為什么要用液體培養(yǎng)基擴(kuò)大？為什么細(xì)胞培養(yǎng)基有那么多不同的名字？常見的1640和DMEM有什么不同？培養(yǎng)基應(yīng)該如何儲存？這一期我們講講細(xì)胞培養(yǎng)所用到的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)不同，可以分為液體培養(yǎng)基（liquid culture medium）、半固體培養(yǎng)基（Semi-solid medium）和固體培養(yǎng)基（solid medium）。液體培養(yǎng)基常用于微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)，半固體培養(yǎng)基常用于觀察微生物的運(yùn)動及菌種保藏，固體培養(yǎng)基則長用于微生物的分離和鑒定。
為什么要用液體培養(yǎng)基擴(kuò)大
培養(yǎng)微生物液體培養(yǎng)基具有能夠進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，在通氣或振蕩的條件下，能增加微生物供氧量，并讓微生物充分接觸營養(yǎng)物質(zhì)。因此，液體培養(yǎng)基有利于微生物的細(xì)胞生長，從而提高微生物的數(shù)量。而固體培養(yǎng)基，通常含有阻礙微生物運(yùn)動的瓊脂。在靜止條件下，培養(yǎng)過程中瓊脂會在微生物菌體周圍形成透過養(yǎng)分的屏障，影響微生物的養(yǎng)分吸收，導(dǎo)致微生物生長緩慢。如何配置液體培養(yǎng)基微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜，不同的微生物有著不同的營養(yǎng)要求。因此，配置液體培養(yǎng)基時(shí)，要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)皿。具體配置原則如下：1)培養(yǎng)基組分應(yīng)適合微生物的營養(yǎng)特點(diǎn)，如細(xì)菌喜葷、霉菌喜素；2)營養(yǎng)無的濃度與比例應(yīng)恰當(dāng)；3)物理化學(xué)條件適宜，如細(xì)菌偏堿、真菌偏酸；4)根據(jù)培養(yǎng)目的選擇原料及其來源，如生產(chǎn)-天然、分類鑒定-合成培養(yǎng)基。常見液體培養(yǎng)基有哪些1)牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，又稱營養(yǎng)肉湯,用于培養(yǎng)細(xì)菌。成分：成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、蒸餾水(或去離子水)1000mL，pH7.4士0.2；2)LB液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)細(xì)菌,常在分子生物學(xué)中應(yīng)用。成分：胰蛋白陳10g、酵母膏5g、NaCL 10g、瓊脂15~20g、雙蒸餾水1000mL，pH7.0；3)豆芽汁液體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)酵母菌和霉菌及霉菌原生質(zhì)體融合。成分：豆芽汁1000mL、磷酸氫二銨1g、KCL 0.2g、MgSO4.7H2O 0.2g，pH6.2-6.4。
為什么細(xì)胞培養(yǎng)基有那么多不同的名字？
培養(yǎng)基有很多不同的名字是因?yàn)楦鶕?jù)不同細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用場景，培養(yǎng)基可以分為多種類型，最常見的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。這些培養(yǎng)基有自己的配方特點(diǎn)和適用范圍。例如，DMEM適用于哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)，而RPMI-1640則適用于淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。此外，還有一些專門用于特定類型細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，如神經(jīng)元培養(yǎng)基、肌肉細(xì)胞培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基是直接購買還是自己配制比較合適呢？我的建議是：常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)直接采購商品化的培養(yǎng)基使用。商品化的培養(yǎng)基通常以即用型的液體形式或粉劑形式提供。這種培養(yǎng)基通常用于常見的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，只要按照合適比例加入血清，就成為了完全培養(yǎng)基，就可以應(yīng)用于細(xì)胞的日常培養(yǎng)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡等實(shí)驗(yàn)中。剛才提到的DMEM、RPMI-1640、MEM等培養(yǎng)基經(jīng)常是以這種即用型的液體或粉劑形式提供給實(shí)驗(yàn)操作者的。此外，除了這些特定配方的即用型培養(yǎng)基意外，還有定制型的培養(yǎng)基，它是指需要根據(jù)特定的配方和比例來自行配制的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基通常用于一些特殊的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，如原代細(xì)胞培養(yǎng)、干細(xì)胞培養(yǎng)等。需要配制的培養(yǎng)基通常包括無血清培養(yǎng)基、低血清培養(yǎng)基、添加了特殊因子的培養(yǎng)基等。這些就需要根據(jù)各自的特殊項(xiàng)目而制定針對性的培養(yǎng)條件了。
常見的1640和DMEM有什么不同？
下面我們以實(shí)驗(yàn)室最常見的DMEM和RPMI-1640為例，來介紹它們之間的不同之處。DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)是一種最廣泛應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)基之一，它是由Eagle于1959年開發(fā)出來的，后由Dulbecco進(jìn)行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類型的哺乳動物細(xì)胞系的培養(yǎng)。DMEM中含有較高濃度的葡萄糖（4500mg/L）、氨基酸、維生素和微量元素等營養(yǎng)物質(zhì)。此外，DMEM還添加了丙酮酸和乳酸等緩沖劑，能夠保持細(xì)胞在較寬的pH范圍內(nèi)正常生長。RPMI-1640(Roswell Park Memorial Institute medium 1640)是一種由Roswell Park紀(jì)念研究所開發(fā)的細(xì)胞培養(yǎng)基，適用于淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、白血病細(xì)胞等多種類型的哺乳動物細(xì)胞系的培養(yǎng)。RPMI-1640中含有較低濃度的葡萄糖（2000mg/L）、氨基酸、維生素和微量元素等營養(yǎng)物質(zhì)。此外，RPMI-1640還添加了緩沖劑HEPES和碳酸氫鹽，能夠保持細(xì)胞在較窄的pH范圍內(nèi)正常生長。DMEM和RPMI-1640在營養(yǎng)成分和緩沖劑的配比上有所不同，上述提到它們各自適合培養(yǎng)的細(xì)胞種類是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證得到的結(jié)果，建議同學(xué)們遵照執(zhí)行即可。但這也并不代表用錯了培養(yǎng)基細(xì)胞就一定會死掉，因?yàn)镈MEM和1640只是在少數(shù)成分上做了針對優(yōu)化，對于大部分細(xì)胞株，即使用錯，也只是不那么合適而已。
購買回來的培養(yǎng)基應(yīng)該如何儲存？
培養(yǎng)基是一種含有大量營養(yǎng)物質(zhì)的復(fù)雜溶液，其成分非常容易受到環(huán)境的影響而發(fā)生變化。因此，在儲存和使用培養(yǎng)基時(shí)需要注意以下幾點(diǎn)：溫度：有條件的情況下，培養(yǎng)基應(yīng)該儲存在4℃冰箱中，避免暴露在高溫環(huán)境中。此外，在使用前需要將培養(yǎng)基恢復(fù)到室溫。光照：培養(yǎng)基應(yīng)該避免暴露在陽光下或強(qiáng)烈的熒光燈下，以免造成成分變化。消毒：在使用前需要對培養(yǎng)基進(jìn)行消毒處理，以避免細(xì)菌和病毒污染。儲存時(shí)間：一般來說，開封后的培養(yǎng)基應(yīng)該在一個(gè)月內(nèi)使用完畢，以避免成分變化造成影響。
以上，就是本期內(nèi)容，希望能對你的實(shí)驗(yàn)有幫助。
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