真皮炎（DD）首先由Cheli和Mortellaro（1974）描述，是一種傳染性蹄病，可引起疼痛性潰瘍，通常在牛蹄冠狀動脈帶上方的皮膚中。除了引起疼痛的病變和跛行外，DD還具有重大的經(jīng)濟影響，因為患有DD的牛產(chǎn)奶量減少，繁殖性能較差（Argáez-Rodriguez等人，1997年）。據(jù)估計，在美國，僅牛奶產(chǎn)量減少的影響每年就達190.2006億美元（Losinger，2006年）。盡管在許多國家，DD在世界范圍內(nèi)都有很高比例的受影響農(nóng)場的報道（Holzhauer等人，2008年，Cramer等人，<>年），但其病因尚不清楚。此外，到目前為止，還沒有可靠的實驗室測試來幫助診斷和臨床評估厭氧培養(yǎng)物中分離的微生物的DD。1
幾種病因?qū)W因素與DD有關(guān)。通過分子技術(shù)分離的細菌包括左旋預(yù)防單胞菌、擬桿菌屬、未分型支原體屬、糞彎曲桿菌和未鑒定的厭氧、非運動、長革蘭陰性桿，尖端和密螺旋體屬螺旋體（D?pfer et al.，1997，Berry et al.，2010，Yano et al.，2010，Santos et al.，2012）。已經(jīng)在顯微鏡下觀察到螺旋體（Read等人，1992），抗密螺旋體抗體可以在血清學上檢測到（Demirkan等人，1999），并且已經(jīng)使用16s核糖體PCR檢測和測序密螺旋體DNA（Demirkan等人，1998年，Evans等人，2008年，Evans等人，2009年）。
通過16s核糖體PCR對螺旋體進行語言分型已經(jīng)確定了四組密螺旋體，對應(yīng)于中密螺旋體/長春品樣密螺旋體、噬菌體樣密螺旋體、足密螺旋體屬新樣和惡密螺旋體/齒狀密螺旋體（Stamm等人，2002年，埃文斯等人，2009年，Brandt等人，2011年）。
目前，從DD病變收集的密螺旋體的體外培養(yǎng)物有助于確定影響真皮組織感染的抗菌藥敏性和酶活性（Evans等人，2008，Evans等人，2011）。密螺旋體的微觀觀察表明，在幾種密螺旋體的純培養(yǎng)物中存在兩種不同的形態(tài)形式（Walker等人，1995年，Choi等人，1997年），其特征為包囊和螺旋形式。作為萊姆病（伯氏疏螺旋體）、鉤端螺旋體?。ㄣ^端螺旋體）和梅毒（梅毒螺旋體）的致病微生物的螺旋體微生物也被記錄為通過這些形態(tài)變化（Warthin和Olsen，1931年，Czekalowki和Eaves，1954年，Brorson和Brorson，1998年，Burgdorfer，1999年）。與DD有關(guān)的密螺旋體形態(tài)之間的轉(zhuǎn)變是一個知之甚少的過程，其對DD的病因、持久性和臨床病程的可能影響尚不清楚。
試圖更好地了解密螺旋體屬在DD病因?qū)W中的作用將受益于對密螺旋體不同形態(tài)形式之間轉(zhuǎn)變的更好了解。在監(jiān)測從螺旋到包埋形式的轉(zhuǎn)變的同時建立生長曲線對于體外量化密螺旋體及其不同形態(tài)至關(guān)重要。本研究的目的是以攝影方式跟蹤形態(tài)變化，并記錄通常從牛DD病變中分離出的三種密螺旋體亞型的四種分離株的生長曲線，即齒狀密螺旋體樣，噬菌體樣密螺旋體（兩種分離株I和II）和中密螺旋體樣。
材料和方法
為本研究制備了四種密螺旋體培養(yǎng)物。密螺旋體樣（菌株：1-9185 MED）分離株由加州大學戴維斯分校的D.Read提供。密螺旋體噬菌體樣分離物-1由R.Zerner（國家動物疾病中心，NADC）提供。密螺旋體噬菌體樣分離物-2（菌株：2-1498）也由加州大學戴維斯分校提供。從威斯康星州的一個奶牛場分離出第四種密螺旋體，并且基于PCR分型（Stamm
結(jié)果
齒狀錐蟲樣分離株的平板計數(shù)和定量PCR值如圖所示。1.平板計數(shù)表明，該亞型在孵育1天后達到7.10×12 CFU/mL的峰值。由于生長速度緩慢和培養(yǎng)箱空間限制，僅在第12天后每隔一天收集一次平板計數(shù)。定量PCR表明培養(yǎng)物在第1天達到6.10×9 CFU/mL的峰值。血細胞計數(shù)器計數(shù)用于螺旋狀齒狀錐蟲樣分離物，囊腫形式可以是811
討論
本研究中研究的密螺旋體亞型（T.denticola樣，T.phagedenis樣和T.medium樣）與傳染性牛DD密切相關(guān)（Walker等人，1995年，Stamm等人，2002年，Evans等人，2008年）。已經(jīng)觀察到這些微生物經(jīng)歷了從螺旋形式到包囊形式的形態(tài)變化（Walker等人，1995年，Choi等人，1997年）。以前的研究沒有確定這些螺旋體經(jīng)歷的形態(tài)變化的任何時間表。
結(jié)論
這項研究表明，與DD病因有關(guān)的三種密螺旋體亞型在體外生長過程中經(jīng)歷了形態(tài)形式的變化。觀察到螺旋形式在密螺旋體培養(yǎng)物的原木生長后凝結(jié)成囊狀形式。這些包囊形式在DD臨床表現(xiàn)中的重要性，特別是其復發(fā)和持續(xù)存在，需要進一步闡明。特別是細菌形態(tài)與治療之間的關(guān)聯(lián)，以及它們之間的關(guān)系。
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