血漿凝固酶是多數(shù)致病菌株能產(chǎn)生的凝固酶，能使含有肝素等抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)，致病株大多數(shù)能產(chǎn)生，是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)。絕大多數(shù)產(chǎn)生血漿凝固酶的細(xì)菌具有致病性，例如金黃色葡萄球菌，因此臨床上會通過進(jìn)行血漿凝固酶試驗(yàn)幫助檢測細(xì)菌的致病性。血漿凝固酶分子量為80449.3，等電點(diǎn)為8.82，耐熱性強(qiáng)，100℃30min仍然保持活性，可被蛋白酶破壞。血漿凝固酶能被人血漿中的協(xié)同因子(cofactor)激活變成凝血酶類似物，進(jìn)而催化可溶性纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，從而使血漿凝固。不溶性纖維蛋白包裹在菌體表面，在其保護(hù)下菌體既能免受血清中殺菌物質(zhì)的作用，也能抵抗巨噬細(xì)胞的吞噬。
葡萄球菌毒力強(qiáng)，為臨床化膿性感染的主要致病菌，比如泌尿道感染、皮膚感染、呼吸道感染、敗血癥、膿毒血癥等。因此早期快速檢測分析細(xì)菌或者菌群生長代謝能否產(chǎn)生凝固酶對臨床治療具有重要意義。凝固酶試驗(yàn)是鑒定葡萄球菌致病性的重要試驗(yàn)。必須用肝素而非枸櫞酸鹽作抗凝劑抗凝的新鮮血漿。致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶，一種是與細(xì)胞壁結(jié)合的凝聚因子，稱結(jié)合凝固酶，它直接作用于血漿中纖維蛋白原，使發(fā)生沉淀，包圍于細(xì)菌外面而凝聚成塊，玻片法陽性結(jié)果是由此凝聚因子所致，玻片法為篩選試驗(yàn)，假陰假陽性率高，陽性、陰性均需進(jìn)行試管法測定。另一種凝固酶是分泌至菌體外，稱為游離凝固酶，它能使凝血酶原變成凝血酶類產(chǎn)物，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。試管法可同時(shí)測定結(jié)合型和游離型凝固酶，但可能出現(xiàn)自凝或假陽性。必須含有足夠濃度的凝固酶反應(yīng)因子和纖維蛋白原，必須無溶纖維蛋白活性和無抑制劑。
中國專利CN104745676A陳開森和劉濤發(fā)明了動態(tài)比濁法檢測血漿凝固酶鑒別金黃色葡萄球菌的方法，該方法用新鮮的正常人混合血漿，通過觀察吸光度的變化而鑒別是否產(chǎn)生了血漿凝固酶，從而確定菌株是呈陽性還是陰性，從而鑒定金黃色葡萄球菌。近來盛成蘭等報(bào)道了動態(tài)比濁法檢測血漿凝固酶的方法。該自動化方法部分解決了基于手工操作和肉眼判斷結(jié)果的玻片法和試管法存在的問題，效率也有所提高，但是需要用到經(jīng)過精細(xì)處理的血漿，而不能測定細(xì)菌在血液中生長代謝是否產(chǎn)生凝固酶。眾所周知，將血液加工制備成血漿需要時(shí)間和成本。此外，更重要的是，被檢測的細(xì)菌或者菌群在加入到血漿之前必需是處于光學(xué)性質(zhì)良好的理想基質(zhì)中。由于該方法基于用濁度原理的儀器自動化生成細(xì)菌生長曲線，如果目標(biāo)細(xì)菌處于血液、肌肉、大便等復(fù)雜樣品中，就需要分離、純化等繁瑣的前處理步驟。因此效率低、成本高，且結(jié)果的準(zhǔn)確性嚴(yán)重依賴于操作人員的熟練程度。
病理、臨床等學(xué)科的發(fā)展亟需一種操作簡便、效率高、成本低且能夠直接測定細(xì)菌在血液中生長代謝是否產(chǎn)生凝固酶的自動化方法。
細(xì)菌在血液中產(chǎn)生凝固酶的自動化鑒定方法，包括以下步驟：
步驟1：一次性檢測管中預(yù)裝入血液，將含有目標(biāo)細(xì)菌或者菌群的待測樣品加入一次性檢測管，將一次性檢測管封口；
步驟2：然后將一次性檢測管插入微生物生長曲線自動化測定儀器中的檢測通道；
步驟3：通過微生物生長曲線自動化測定儀器測定的細(xì)菌生長曲線形狀判斷目標(biāo)細(xì)菌或者菌群在血液中生長代謝是否產(chǎn)生凝固酶。
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