芽孢桿菌在動物上應(yīng)用主要依賴其在腸道或環(huán)境中繁殖分泌消化酶、維生素或抗菌物質(zhì)而達到益生的功能。同一菌株在不同生長環(huán)境中繁殖和分泌產(chǎn)物能力有很大差異，不同菌株之間的生長潛力和分泌產(chǎn)物類別同樣有較大差異。本文主要探究枯草與解淀粉芽孢桿菌的生理生化指標差異，及枯草、地衣與解淀粉芽孢桿菌低溫生長和平板上的產(chǎn)酶比較，以期探尋三類芽孢之間性能差異的規(guī)律，為其在動物養(yǎng)殖中的應(yīng)用方案提供菌株性能基礎(chǔ)數(shù)據(jù)指導(dǎo)。
生長曲線制作
從-80℃冰箱取出保種甘油管，用接種環(huán)挑取一環(huán)菌液，采用劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)至出現(xiàn)單菌落。從平板上挑取一環(huán)菌苔，接種到盛有100 mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，作為種子。
將種子液按3%接種量接種到盛有100 mL LB液體培養(yǎng)基中，15℃或28℃、200 r/min連續(xù)培養(yǎng)24～80 h，每隔4～8 h在超凈工作臺進行取樣，采用分光光度計測定600 nm處吸光值，如菌液過濃，用純凈水進行適當(dāng)稀釋，吸光值控制在0.3～0.6，用相應(yīng)稀釋倍數(shù)的LB培養(yǎng)基作為對照。以培養(yǎng)時間t為橫坐標，吸光值OD600為縱坐標，制作生長曲線圖。
酪素培養(yǎng)基：干酪素10 g，酵母膏1 g，瓊脂20 g，用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為7.0，用蒸餾水定容至1 L，121℃滅菌30 min。
淀粉培養(yǎng)基：可溶性淀粉2 g，蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化鈉5 g，瓊脂20 g，用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為7.2，用蒸餾水定容至1 L，121℃滅菌30 min。
染色液酸性汞試劑：HgCl215 g，濃HCl 20 mL，加蒸餾水至100 mL。
盧哥氏碘液：碘片1 g，碘化鉀2 g。先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀中，待碘全溶后，加蒸餾水至300 mL。
生長曲線繪制
15℃生長曲線試驗測定了芽孢桿菌在低溫（15℃）下生長情況，每隔8 h取樣測定吸光值，共培養(yǎng)80 h。試驗表明，兩株解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌1號在低溫條件下生長好于其余兩株枯草和地衣芽孢桿菌。隨著時間延長，枯草芽孢桿菌1號的生物量最大，在72 h OD600達到8.0，兩株解淀粉芽孢桿菌最高OD600也出現(xiàn)在48 h以后，最高值為3.8～4.4?？莶菅挎邨U菌2號和3號在15℃下生長情況較差，48 h后才進入對數(shù)生長期，而兩株地衣芽孢桿菌生物量80 h內(nèi)一直低于1.0。綜上，試驗中兩株解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌1號相較于其他四株芽孢桿菌更能耐受低溫，較適宜在低溫水產(chǎn)養(yǎng)殖水體應(yīng)用（圖1和圖2）。
圖1枯草芽孢桿菌15℃生長曲線
圖2地衣和解淀粉芽孢桿菌15℃生長曲線
28℃生長曲線芽孢桿菌在28℃下生長較為迅速，所評估的7株芽孢桿菌都在4 h內(nèi)進入對數(shù)生長期，24 h即可到達穩(wěn)定期，生長明顯快于低溫下。但研究表明，枯草芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌28℃下最高OD600值均低于15℃，因此，同一株菌28℃時最高生物量不一定高于15℃。地衣芽孢桿菌在低溫下生長最差的狀態(tài)，在28℃下長勢甚至好于解淀粉芽孢桿菌和部分枯草芽孢桿菌（圖3和圖4）。
圖3枯草芽孢桿菌28℃生長曲線
圖4地衣和解淀粉芽孢桿菌28℃生長曲線
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