化膿隱秘桿菌（Trueperella pyogenes），于1893年首次發(fā)現(xiàn)，原稱化膿棒狀桿菌（Corynebacterium pyogenes），化膿放線菌（Actinomyces pyogenes），1997年pascual Ramos et.al將該菌從放線菌屬中重新分類為隱秘桿菌屬?；撾[秘桿菌在隱秘桿菌屬中致病性最強，同時也是一種條件性致病菌，化膿隱秘桿菌不僅感染牛羊豬等經(jīng)濟類動物，同時也會感染貓，狗，兔，狐貍，猴，鵝，鴨等其他動物。
化膿隱秘桿菌為革蘭氏陽性菌種，且不易染色，具有多形性，多呈逗號狀、弧形或者短桿狀，無莢膜和芽孢，菌體著色不均，常散在，也有呈叢或2～4個并列排列?；撾[秘桿菌的生長溫度為20～40℃，其中最適宜生長溫度為37℃。好氧或兼性好氧，在5%～10%CO2環(huán)境條件下或添加血液、血清可促進其生長?；撾[秘桿菌在血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)24～48 h后可形成針尖狀、表面光滑的、灰白色、直徑1 mm的菌落，并且在菌落周圍形成β-溶血環(huán)。
為了研究化膿隱秘桿菌的致病性，與免疫性，生長曲線與毒力測定是重要的實驗數(shù)據(jù)，實驗采用BHI液體培養(yǎng)基對化膿隱秘桿菌HJ-1進行培養(yǎng)，通過測定生長曲線對化膿隱秘桿菌HJ-1的生長規(guī)律進行了解，同時測定化膿隱秘桿菌HJ-1菌株對小鼠的半數(shù)致死量，為后續(xù)化膿隱秘桿菌的疫苗研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
化膿隱秘桿菌HJ-1型生長曲線的測定及細菌計數(shù)
將化膿隱秘桿菌HJ-1型純培養(yǎng)后，取37℃恒溫搖床培養(yǎng)48 h的化膿隱秘桿菌HJ-1型菌液，按1%的比例接種到30 mL 5%BHI液體培養(yǎng)基中，于37℃80 rpm恒溫培搖床中培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h各時間點取菌液1 mL，并以5%BHI液體培養(yǎng)基為對照組測定其OD600值，每個時間點重復(fù)測定3次，取其平均值。
取培養(yǎng)至2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24 h時間點的化膿隱秘桿菌的菌液，做10倍比稀釋，即取100μL菌液加入到900μL的生理鹽水中，充分混勻后，從中取100μL加入到900μL的生理鹽水中，充分混勻，依次稀釋，使最終的稀釋倍數(shù)為1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8，然后各取菌液100μL，均勻涂布到血液營養(yǎng)瓊脂平板上，每個梯度重復(fù)3次，置于37℃恒溫過夜培養(yǎng)，48 h后計數(shù)平板菌落數(shù)，有效計數(shù)為每個平板20～300個菌落。做細菌活體計數(shù)，觀察化膿隱秘桿菌HJ-1型生長狀況并繪制該菌株的生長曲線。
化膿隱秘桿菌HJ-1細菌計數(shù)及生長曲線的測定
根據(jù)（表1）顯示表明：化膿隱秘桿菌HJ-1型在37℃恒溫搖床培養(yǎng)0～4 h細菌生長緩慢從8 h開始細菌快速生長，12～14 h為化膿隱秘桿菌HJ-1型的對數(shù)生長期，生長至22 h細菌生長至高峰，此時的OD600值為0.81，菌落數(shù)為6.4×1011cfu（表2），之后化膿隱秘桿菌HJ-1型進入平臺期（圖1）。
表1化膿隱秘桿菌HJ-1生化鑒定結(jié)果
表2化膿隱秘桿菌細菌計數(shù)
化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠半數(shù)致死量測定
實驗組前期已經(jīng)測定，化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠最大致死量（Dm）為1.84×109cfu，逐步降低攻毒計量，直到測的小鼠未發(fā)生死亡的感染計量。并測定了該株化膿隱秘桿菌感染小鼠最低致死量（Dn）為1.53×108cfu，根據(jù)改進寇氏算法計算出化膿隱秘桿菌HJ-1感染小鼠的半數(shù)致死量，結(jié)果見（表3）。
表3化膿隱秘桿菌HJ-1型感染小鼠半數(shù)致死量測定
圖1化膿隱秘桿菌HJ-1型生長曲線
根據(jù)公式：半數(shù)致死量公式logLD50=Xm-i（Σp-0.5）
測定HJ-1型化膿隱秘桿菌半數(shù)致死量為：4.16×108cfu
結(jié)論
測定了化膿隱秘桿菌HJ-1的生長曲線，確定其對數(shù)生長期為12～14 h，處于該時期的菌活力最強，感染能力最好，用對數(shù)生長期的化膿隱秘桿菌進行感染具有更好的致病性。測定了化膿隱秘桿菌HJ-1型對小鼠的半數(shù)致死量LD50=4.16×108cfu。試驗結(jié)果為以后研究化膿隱秘桿菌的致病力與對動物的接種試驗提供了依據(jù)。
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