松針精油作為天然防腐劑，目前研究主要集中在食品防腐方面，對(duì)青貯飼料中微生物抑制效果的研究尚未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究松針精油對(duì)青貯飼料中主要微生物（嗜酸乳桿菌、梭狀芽孢桿菌、酵母菌、串珠鐮刀菌）的抑制效果，為松針精油在青貯飼料抑菌方面的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。
菌種：嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilusCICC6075）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiaeCICC1810）、梭狀芽孢桿菌（Bacillus fusiformisCICC10067）、串珠鐮刀菌（Fusarium moniliformeCICC2490）
將供試菌種（嗜酸乳桿菌、梭狀芽孢桿菌、酵母菌、串珠鐮刀菌）培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，取出部分菌液，分為對(duì)照組和松針精油組，對(duì)照組將菌液直接用相應(yīng)的液體培養(yǎng)基稀釋到菌體個(gè)數(shù)為105～106CFU/ml；精油組將菌液加到含精油濃度為最低抑菌濃度的液體培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)。分別在0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、48 h取樣測(cè)活菌數(shù)，制作出對(duì)照組生長(zhǎng)曲線和精油組生長(zhǎng)曲線。
圖1松針精油對(duì)嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)曲線的影響
由圖1可知，對(duì)照組嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)曲線完全符合“S”型生長(zhǎng)曲線，有明顯的遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。在0～4 h處于遲緩期，4 h～16 h進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，16～24 h進(jìn)入穩(wěn)定期，從24 h之后進(jìn)入衰亡期，最大活菌數(shù)為1.08×109CFU/ml。加入松針精油之后，嗜酸乳桿菌的遲緩期仍為0～4 h，而對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期延長(zhǎng)至20 h，并且最大活菌數(shù)較對(duì)照組增加27.36%?？梢?，松針精油對(duì)嗜酸乳桿菌并沒有起到抑制效果，反而起到了一定的促進(jìn)作用，延長(zhǎng)了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，導(dǎo)致菌體數(shù)量達(dá)到了一個(gè)新的峰值，并且延緩了衰亡期的到來。
圖2松針精油對(duì)酵母菌生長(zhǎng)曲線的影響
由圖2可知，對(duì)照組酵母菌的生長(zhǎng)曲線符合微生物正常的生長(zhǎng)規(guī)律，有明顯的遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期以及衰亡期。在0 h～8 h處于遲緩期，8 h以后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，24 h以后進(jìn)入穩(wěn)定期，32 h以后進(jìn)入衰亡期，最大活菌數(shù)為6.7×108CFU/ml。加入松針精油之后，酵母菌的遲緩期被延長(zhǎng)，延長(zhǎng)至16 h，16 h以后進(jìn)入短暫的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而且對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體數(shù)量沒有達(dá)到正常的峰值，其最大活菌數(shù)較對(duì)照組降低56.72%，并經(jīng)過短暫的穩(wěn)定期，迅速進(jìn)入衰亡期。因此，可以看出，松針精油對(duì)酵母菌有著較強(qiáng)的抑制作用，破壞了酵母菌的生長(zhǎng)規(guī)律，遲緩期時(shí)間變長(zhǎng)，較大幅度地降低了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體的生長(zhǎng)峰值。
圖3松針精油對(duì)串珠鐮刀菌生長(zhǎng)曲線的影響
由圖3可知，對(duì)照組串珠鐮刀菌在0～16 h處于生長(zhǎng)遲緩期，16～36 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，36～48 h處于穩(wěn)定期，最大活菌數(shù)為2.5×109CFU/ml。在加入松針精油后，串珠鐮刀菌生長(zhǎng)遲緩期延長(zhǎng)到24 h，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期縮短到32 h，并且菌體數(shù)量的峰值較對(duì)照組菌體降低39.68%。由以上分析可看出，松針精油對(duì)串珠鐮刀菌的生長(zhǎng)有著極為明顯的抑制效果，能較長(zhǎng)時(shí)間的抑制串珠鐮刀菌的生長(zhǎng)，縮短了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌種的生長(zhǎng)時(shí)間，大幅度降低最大活菌數(shù)。
圖4松針精油對(duì)梭狀芽孢桿菌生長(zhǎng)曲線的影響
由圖4可知，對(duì)照組梭狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)曲線符合“S”型生長(zhǎng)曲線，在0 h～8 h處于遲緩期，8 h～24 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，24 h～32 h處于穩(wěn)定期，32 h～48 h處于衰亡期，最大活菌數(shù)為8.8×108CFU/ml。加入松針精油后，遲緩期延長(zhǎng)到12 h，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期縮短，最大活菌數(shù)較對(duì)照組菌體降低61.14%，并且經(jīng)過短暫的穩(wěn)定期，迅速進(jìn)入衰亡期?？梢?，松針精油對(duì)梭狀芽孢桿菌有一定的抑制作用。
生長(zhǎng)曲線法可通過微生物的生長(zhǎng)曲線反映群體的生長(zhǎng)規(guī)律，揭示藥物的抑菌效力，并從中判斷藥物對(duì)微生物產(chǎn)生的效果等各種信息[21]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組菌體的生長(zhǎng)曲線符合“S”型生長(zhǎng)曲線，遵循微生物正常的生長(zhǎng)規(guī)律。而添加松針精油之后，酵母菌、梭狀芽孢桿菌以及串珠鐮刀菌的生長(zhǎng)受到抑制，遲緩期延長(zhǎng)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期縮短，并且最大活菌數(shù)較對(duì)照組有較大幅度的下降。
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