摘要
本試驗(yàn)旨在探究從羊瘤胃內(nèi)容物中分離的乳酸菌對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。首先對(duì)乳酸菌進(jìn)行分離純化、形態(tài)學(xué)鑒定并結(jié)合16S rDNA測(cè)序,通過生長(zhǎng)曲線與產(chǎn)酸曲線證實(shí)其具有較好的生長(zhǎng)性能與產(chǎn)酸能力;牛津杯雙層平板法檢測(cè)分離的乳酸菌對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用;乳酸抑菌試驗(yàn)探究分離的乳酸菌對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株發(fā)揮抑菌作用的最適pH。結(jié)果顯示:從羊瘤胃內(nèi)容物中分離的1株乳酸菌——糞腸球菌N3-1①具有良好的抑菌活性;該乳酸菌的無菌發(fā)酵上清液原液對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株有抑菌作用,但經(jīng)氫氧化鈉(NaOH)處理后抑菌圈消失,表明該乳酸菌的無菌發(fā)酵上清液接近中性,不能發(fā)揮對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。乳酸抑菌試驗(yàn)說明,pH為1.4~2.1時(shí)乳酸溶液對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株有一定的抑制作用,pH大于3.8時(shí),無論是乳酸溶液還是乳酸菌無菌發(fā)酵上清液均不能觀察到對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC29213株的抑制作用。結(jié)論:本試驗(yàn)從羊瘤胃內(nèi)容物分離出1株具有良好抑菌活性的乳酸菌——糞腸球菌N3-1①。通過產(chǎn)酸試驗(yàn)、乳酸抑菌試驗(yàn)和用NaOH處理乳酸菌無菌發(fā)酵上清液作用于金黃色葡萄球菌ATCC29213株,證明乳酸菌無菌發(fā)酵上清液中發(fā)揮抑菌活性的物質(zhì)為有機(jī)酸類,乳酸發(fā)揮作用的最適pH為1.4~2.1,這可為后續(xù)研究乳酸菌活性物質(zhì)的抑菌機(jī)制提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。
金黃色葡萄球菌是奶牛乳房炎最主要的病原菌,它所引起的奶牛乳房炎占所有細(xì)菌性乳房炎的30%~50%。據(jù)統(tǒng)計(jì),美國(guó)每年由于奶牛乳房炎造成15億~30億美元的牛奶損失,占其牛奶總量的11%。細(xì)菌、真菌和支原體等都能引起奶牛乳房炎,常見的奶牛乳房炎致病菌主要有葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌等?？股卦陲暳咸砑觿┲械牟缓侠硎褂靡约芭R床治療奶牛乳房炎導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性增加,“飼料禁抗”已成為國(guó)際畜牧業(yè)發(fā)展的必然趨勢(shì)。
目前,乳酸菌至少可分為18個(gè)屬200多個(gè)種,主要包括乳桿菌屬(Lactobacillus)、腸球菌屬(Enterococcus)等。乳酸菌可產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì),如乳酸、短鏈脂肪酸、過氧化氫(H2O2)、一氧化氮(NO)和細(xì)菌素等,這些物質(zhì)幫助其競(jìng)爭(zhēng)性抑制致病菌的黏附和定植,發(fā)揮益生功能。乳酸菌具有益生特性,主要體現(xiàn)在調(diào)節(jié)腸道菌群、緩減腸道疾病、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗氧化等方面。Espeche等對(duì)從健康奶牛乳腺中分離的數(shù)百株乳酸菌的益生特性進(jìn)行了評(píng)價(jià),表明乳酸菌能夠有效抑制金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大腸桿菌(Escherichia coli)等病原菌的生長(zhǎng),為防治奶牛乳房炎提供了豐富的選擇。目前關(guān)于羊瘤胃內(nèi)容物和牛糞中是否存在能有效抑制奶牛乳房炎性金黃色葡萄球菌的乳酸菌的研究較少。因此,本試驗(yàn)從羊瘤胃內(nèi)容物和牛糞中分離出乳酸菌菌株,并驗(yàn)證其中是否存在能有效抑制奶牛乳房炎性金黃色葡萄球菌的菌株,同時(shí)探究相關(guān)菌株發(fā)揮作用的主要成分和最適pH環(huán)境,以期為奶牛乳房炎的防治提供參考。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1試驗(yàn)菌株
從新疆阿克蘇市新和縣某肉牛場(chǎng)(飼養(yǎng)少量羊只)采集5頭健康肉牛的新鮮糞便(每頭肉牛各取1份糞便樣品),對(duì)屠宰的1只健康羊無菌采集其瘤胃內(nèi)容物7份,同時(shí)采集2份青貯飼料樣品。將采集的樣品裝于50 mL滅菌離心管中,冷藏后送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌株分離,并按照如下方法對(duì)分離的菌株進(jìn)行命名:N代表自羊瘤胃內(nèi)容物中分離;F代表自牛糞中分離;S代表自青貯飼料中分離。第1個(gè)阿拉伯?dāng)?shù)字代表樣品編號(hào);第2個(gè)阿拉伯?dāng)?shù)字代表所使用的菌株為純化的菌株類型;圓圈內(nèi)阿拉伯?dāng)?shù)字代表該菌株類型的第幾株克隆。金黃色葡萄球菌ATCC29213株由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院陳偉教授實(shí)驗(yàn)室吳自豪提供,屎腸球菌(Enterococcus faecium)5號(hào)株由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院郭雪峰教授惠贈(zèng),戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus)12號(hào)株由塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院任曉鏷副教授提供。
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