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研究報道，在正常膀胱黏膜上皮和黏膜固有層組織中，有大量的CD4+、CD8+T細(xì)胞和DC細(xì)胞存在，而巨噬細(xì)胞只少量存在于固有層組織中。但是，膀胱癌組織中免疫細(xì)胞的分布情況并不清楚。因此，我們進(jìn)行了前期研究，結(jié)果表明除CD3、CD8外，巨噬細(xì)胞表面特征性CD68分子在癌組織的間質(zhì)細(xì)胞中的染色呈強(qiáng)陽性，而CD68在癌旁正常組織中的表達(dá)呈陰性，提示巨噬細(xì)胞在膀胱癌組織中的浸潤增多可能與膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系。
巨噬細(xì)胞是在組織中定植分化的單核細(xì)胞，具有吞噬活性，通常根據(jù)其分化狀態(tài)和功能作用分為M1和M2亞型。M1巨噬細(xì)胞具有促炎特性(例如分泌IL-12和活性氧)，可以識別和殺傷腫瘤細(xì)胞；M2巨噬細(xì)胞具有抗炎特性，并分泌IL-10，生長因子-β(TGF-β)，和促血管生成因子等，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。在腫瘤組織中，M1巨噬細(xì)胞數(shù)目越多，患者預(yù)后越好；反之，M2巨噬細(xì)胞數(shù)目多，則患者預(yù)后較差。本研究采用免疫組化實驗檢測M1和M2型巨噬細(xì)胞表面特征性標(biāo)志分子在膀胱癌組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細(xì)胞表面特征性分子CD163在癌間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高，提示M2型巨噬細(xì)胞在膀胱癌微環(huán)境中聚集增多，可能與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系。
研究報道，早期的腫瘤細(xì)胞可分泌CCL2、IL-10、TGF-β等募集單核細(xì)胞至上皮內(nèi)并向M2型巨噬細(xì)胞極化，成為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated machrophage，TAM)。反過來，TAM又可分泌IL-10、TGF-β、EGF、Wnt等影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路，引起腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。因此，TME中的TAM可通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的信號通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。為篩選巨噬細(xì)胞調(diào)控的下游靶點(diǎn)基因，本研究通過對膀胱癌和癌旁組織的轉(zhuǎn)錄組測序并結(jié)合膀胱癌組織中浸潤的免疫細(xì)胞評分方法，篩選出受巨噬細(xì)胞調(diào)控的下游靶點(diǎn)基因CLDN10。CLDN10蛋白分子定位于細(xì)胞膜，是claudin家族成員之一，而claudin家族構(gòu)成了上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞間的分子屏障，是細(xì)胞間緊密連接(tight junction，TJ)的重要組成之一。近年來的研究表明，CLDN10的表達(dá)異?；蚬δ苁д{(diào)與人體腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有密切關(guān)系，CLDN10的表達(dá)與甲狀腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌和腎癌等腫瘤患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。在膀胱癌中，TCGA數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明CLDN10的表達(dá)與膀胱癌患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。國內(nèi)也有研究報道CLDN10在膀胱癌組織表達(dá)，且CLDN10表達(dá)失調(diào)可能與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過程相關(guān)。但是巨噬細(xì)胞調(diào)控CLDN10基因表達(dá)的具體作用機(jī)制尚不清楚。
國外研究結(jié)果表明，巨噬細(xì)胞可分泌TNF-α，TNF-α可促進(jìn)肝癌、皮膚癌等腫瘤細(xì)胞的增殖。SCHMITZ等研究發(fā)現(xiàn)TNF-α可以影響TJ蛋白的結(jié)構(gòu)和功能造成小腸上皮的分子間屏障的破壞，引起小腸炎。本研究結(jié)果也表明，當(dāng)敲低膀胱癌細(xì)胞中CLDN10的表達(dá)后，膀胱癌細(xì)胞的生長能力和細(xì)胞克隆形成能力明顯下降，說明CLDN10具有促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞生長和增殖的能力。
膀胱癌是一種高度惡性的腫瘤，易通過淋巴結(jié)引流發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。眾所周知，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)使細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間的分子屏障，導(dǎo)致細(xì)胞的運(yùn)動能力加強(qiáng)，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。CLDN10作為上皮細(xì)胞膜上的緊密連接蛋白重要構(gòu)成之一，通過使細(xì)胞之間形成緊密結(jié)合而構(gòu)成了細(xì)胞間的屏障，限制了細(xì)胞的運(yùn)動活性和分子物質(zhì)在細(xì)胞間的濾過。那么，CLDN10在膀胱癌組織中高表達(dá)是否會促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移呢？有研究表明，CLDN10的表達(dá)降低或在細(xì)胞膜上的定位減少則可以引起細(xì)胞極性和運(yùn)動能力的改變，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。那么，CLDN10的高表達(dá)與膀胱癌細(xì)胞EMT是否相關(guān)呢？本研究結(jié)果表明，當(dāng)敲低膀胱癌細(xì)胞CLDN10的表達(dá)后，EMT相關(guān)蛋白Snail、Vementin、Twist的表達(dá)水平下降，說明CLDN10具有促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞EMT發(fā)生的能力。
本研究對膀胱癌腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制進(jìn)行了初步探索，通過體內(nèi)外基因測序的方法聯(lián)合膀胱癌微環(huán)境免疫評分的方法篩選出與巨噬細(xì)胞調(diào)控相關(guān)的CLDN10基因，并通過軟件分析和查閱文獻(xiàn)的方法對巨噬細(xì)胞調(diào)控CLDN10基因促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制進(jìn)行了初步探索，證明了CLDN10與膀胱癌的增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)，但是這一過程是否與巨噬細(xì)胞的調(diào)控相關(guān)及其具體的作用機(jī)制仍尚不清楚，需要進(jìn)一步深入地研究。從長遠(yuǎn)打算，研究巨噬細(xì)胞促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，可以為免疫治療膀胱癌提供新的理論依據(jù)和治療策略，研究意義重大。
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