摘要:【目的】調(diào)查雞腸道內(nèi)大腸桿菌分泌腸菌素的水平，以及其對(duì)空腸彎曲菌的促生長(zhǎng)作用。【方法】利用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA(ic-ELISA)方法檢測(cè)臨床分離的30株雞腸道大腸桿菌分離株的腸菌素產(chǎn)量;利用λRed同源重組系統(tǒng)構(gòu)建大腸桿菌entB基因缺失突變株，并用ic-ELISA方法測(cè)定大腸桿菌親本株和突變株的腸菌素產(chǎn)量;檢測(cè)親本株和突變株在不同限鐵培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線;將大腸桿菌親本株和突變株培養(yǎng)上清接種空腸彎曲菌，探究大腸桿菌腸菌素對(duì)空腸彎曲菌生長(zhǎng)的影響?！窘Y(jié)果】30株雞腸道大腸桿菌分離株分泌腸菌素水平介于11~126μmol/L之間。利用λRed同源重組系統(tǒng)成功構(gòu)建2株大腸桿菌entB基因缺失突變株。定性結(jié)果顯示，大腸桿菌親本株在CAS培養(yǎng)基中產(chǎn)生黃色暈圈，而entB基因缺失株不產(chǎn)生暈圈。ic-ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，親本株分泌腸菌素濃度為100~150μmol/L，而基因缺失株未檢測(cè)出腸菌素。大腸桿菌親本株和entB基因缺失株在富鐵培養(yǎng)基中生長(zhǎng)無顯著差異(P大于0.05)，在限鐵培養(yǎng)基中達(dá)到平臺(tái)期的D600nm值分別為0.6和0.3。促生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，大腸桿菌親本株培養(yǎng)上清接種空腸彎曲菌24和36h，菌落數(shù)分別為7.8和8.2lgCFU/mL，而entB基因缺失株培養(yǎng)上清接種后菌落數(shù)分別為7.0和7.3lgCFU/mL?！窘Y(jié)論】大腸桿菌具有分泌腸菌素的能力，且其在限鐵環(huán)境下能促進(jìn)空腸彎曲菌的生長(zhǎng)，試驗(yàn)結(jié)果為深入研究腸菌素介導(dǎo)的腸道細(xì)菌之間的相互作用奠定基礎(chǔ)。
細(xì)菌新陳代謝過程需要鐵元素的參與，獲取鐵的能力與其毒力大小密切相關(guān)。為限制外源細(xì)菌在體內(nèi)獲取鐵元素，宿主通過營(yíng)養(yǎng)免疫等將體內(nèi)可直接利用的游離鐵濃度限制在極低的水平，而病原微生物通過合成并利用鐵載體來對(duì)抗宿主的防御。
鐵載體是一種對(duì)鐵具有高度親和力的小分子化合物，鐵載體的可用性和多樣性直接影響病原菌的生長(zhǎng)和定植宿主的能力。腸菌素(enterobactin，Ent)是具有最高親和力的鐵載體之一，主要由腸桿菌科(Enterobacteriaceae)細(xì)菌產(chǎn)生，如大腸桿菌、沙門菌及肺炎克雷伯菌等，首次于1970年在腸桿菌科細(xì)菌分泌物中被鑒定，在合成過程中需要多種酶的參與。腸菌素除攝取鐵為細(xì)菌利用外，還具有促進(jìn)細(xì)菌定植及生物膜形成等多種生物學(xué)活性。研究表明，不同種屬細(xì)菌之間可相互利用異源腸菌素，如空腸彎曲菌(Campylobacterjejuni)自身不能合成腸菌素，但可利用其他細(xì)菌生產(chǎn)的腸菌素為自身獲取鐵。因此，腸菌素在細(xì)菌生長(zhǎng)和定植宿主過程中發(fā)揮重要作用。
空腸彎曲菌是世界范圍內(nèi)感染最普遍的食源性病原菌之一，人感染引起細(xì)菌性腸炎和腹瀉，而且與多種自身免疫性疾病如格林-巴利綜合征等密切相關(guān)。帶菌的家禽及產(chǎn)品是人感染該菌的主要來源，據(jù)統(tǒng)計(jì)，人感染病例中50%~80%與家禽直接相關(guān)?？漳c彎曲菌獲取鐵才能在家禽體內(nèi)生長(zhǎng)和定植，而腸菌素介導(dǎo)的鐵攝取系統(tǒng)是其重要的鐵獲取途徑，該菌腸菌素受體失活后在雞腸道內(nèi)定植能力顯著降低。由于空腸彎曲菌自身不能分泌腸菌素，但可利用宿主腸道內(nèi)其他微生物分泌的腸菌素，因此研究空腸彎曲菌與宿主腸道內(nèi)其他細(xì)菌的協(xié)同關(guān)系對(duì)揭示其定植機(jī)制具有重要意義。
本研究利用間接ELISA法檢測(cè)臨床分離的雞腸道大腸桿菌分離株的腸菌素產(chǎn)量，進(jìn)而利用λRed同源重組技術(shù)構(gòu)建大腸桿菌entB基因缺失突變株，測(cè)定親本株和突變株的腸菌素產(chǎn)量以及在不同限鐵培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)能力，利用親本株和突變株培養(yǎng)上清培養(yǎng)空腸彎曲菌，探究大腸桿菌腸菌素對(duì)空腸彎曲菌生長(zhǎng)的影響，以期為深入研究腸菌素介導(dǎo)的腸道細(xì)菌之間的相互作用奠定基礎(chǔ)。
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