對(duì)五味子乙素進(jìn)行清除自由基及體外抑菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：五味子乙素對(duì)自由基的清除效果明顯，其中對(duì)羥自由基清除作用大于相同質(zhì)量濃度的VC，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.2mg/mL；對(duì)超氧陰離子自由基清除作用小于VC，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.24mg/mL。五味子乙素提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、沙門氏菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有一定的抑制作用，其中對(duì)白色念珠菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)，最低抑菌濃度為0.25mg/mL，對(duì)根霉、黑曲霉、南洋酵母無明顯抑菌活性。
五味子為木蘭科植物五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill)的果實(shí)，習(xí)稱“北五味子”?！吨腥A人民共和國藥典》中規(guī)定其果實(shí)、種子、藤莖均可入藥。其廣泛分布于我國東北部山區(qū)，它的干燥成熟果實(shí)為臨床常用的滋補(bǔ)性中藥，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心的功效。木脂素類成分是五味子的主要藥用成分，主要具有抗腫瘤、抗病毒、保肝、抗衰老等作用。五味子乙素作為五味子木脂素的主要活性成分之一，伴隨著人們對(duì)木脂素的研究而備受關(guān)注。近年來研究表明，五味子乙素具有保肝、抗癌、抗?jié)兊人幚碜饔茫呀?jīng)被應(yīng)用到醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域中。但國內(nèi)外目前對(duì)于五味子乙素單體的體外抗氧化研究多集中在體內(nèi)組織抗氧化能力，而對(duì)體外抗氧化能力研究的相關(guān)報(bào)道較少；關(guān)于五味子提取物抑菌作用研究，多在五味子總木脂素混合物的抑菌作用研究，其中木脂素單體的抑菌作用和機(jī)理研究較少。
本實(shí)驗(yàn)采用將超臨界萃取五味子粉末，液相色譜制備后的五味子乙素提取液進(jìn)行清除自由基及抑菌作用的研究，為開發(fā)北五味子深加工產(chǎn)品提供依據(jù)，也為五味子乙素的研發(fā)提供新的可利用資源。
1材料與方法
1.1材料與試劑
五味子，2009年10月采于遼寧省新賓縣，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)趙百鎖副教授鑒定為北五味子。
五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%)上海同田生物科技有限公司；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀、硫酸亞鐵、鄰菲羅琳、抗壞血酸、鄰苯三酚、濃硫酸、濃鹽酸、雙氧水、無水乙醇、甲醇、三羥甲基氨基甲烷均為分析純沈陽化學(xué)試劑廠。
細(xì)菌：枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、白色念珠菌(Candida albicans)、沙門氏菌(Salmonella)；真菌：南洋酵母(Nanyang yeast)、黑曲霉(Aspergillus niger)、根霉(Rhizopus)。
培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基。
1.2儀器與設(shè)備
UV-1600型紫外-可見分光光度計(jì)；電熱恒溫水浴鍋；電子分析天平；Bioscreen全自動(dòng)微生物生長曲線分析儀；FT-IR200型傅里葉變換紅外光譜儀；5890高效液相色譜儀。
1.3方法
1.3.1五味子乙素提取液清除自由基研究
1.3.1.1五味子乙素提取液清除羥自由基的測定
采用超臨界CO2提取五味子粉末，在壓力30MPa，溫度40℃，粒度40目，時(shí)間2h條件下，得到五味子乙素的提取率為3.519mg/g，采用制備液相Symmetry C18色譜柱分離，以甲醇-水為流動(dòng)相，配比70:30洗脫，收集31.2～32.4min五味子乙素提取液。稀釋收集五味子乙素提取液，使五味子乙素的質(zhì)量濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL，另配制相同質(zhì)量濃度梯度的抗壞血酸溶液作比較。
五味子乙素提取液結(jié)構(gòu)鑒定：五味子乙素提取液進(jìn)行紅外光譜和HPLC測定，根據(jù)目標(biāo)成分的峰面積的百分比得出其純度。
參照Fenton反應(yīng)體系及林硯淋等的方法進(jìn)行改進(jìn)，依次加入反應(yīng)液。反應(yīng)體系置于37℃恒溫水浴鍋中，準(zhǔn)確反應(yīng)90min后，立即取出并迅速測定其在536nm波長處的吸光度(蒸餾水作參比，便于提高精度，測3次，取平均值)。清除率的計(jì)算如式(1)所示。
式中：A0為空白組的吸光度；A1為加入0.03%雙氧水的吸光度；A樣品為加入樣品和0.03%雙氧水的吸光度。
1.3.1.2五味子乙素提取液清除超氧陰離子自由基的測定
樣品制備：稀釋分離純化后的五味子乙素提取液，使五味子乙素的質(zhì)量濃度分別為：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL，另配制相同質(zhì)量濃度梯度的抗壞血酸溶液作比較。具體步驟參照鄰苯三酚自氧化法，在波長325nm處測定吸光度。
式中：A00為空白組吸光度；A01為加入鄰苯三酚溶液的吸光度；A10為加入樣品溶液的吸光度；A325為加入樣品和鄰苯三酚溶液的吸光度。
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