2結果
2.1噬菌體宿主范圍
噬菌體MYSP03對宿主菌Flavobacterium sp.MYB03是特異性的，不能侵染實驗采用的其他37株受試菌。而MYSP08與MYTP08具有共同的宿主菌Havobacterium sp.MYB08，不能侵染其他的受試菌株。
2.2噬菌體電鏡形態(tài)觀察
噬菌體電鏡形態(tài)及噬菌斑特征見圖1，噬菌體MYSP03與MYSP08都為頭尾復合結構，頭部呈立體對稱。MYSP03頭部直徑為76.5nm，尾管長約260nm，尾管直徑約10nm(表2)，末端具有呈螺旋狀彎曲的尾板結構，這與之前的報道存在細微誤差(直徑約74nm，尾管長約240nm)。MYSP08頭部直徑約66nm，尾管長約180nm，尾管直徑與MYSP03相仿；而噬菌體MYTP08只有衣殼結構清晰可見，直徑約58am，未見尾管結構。因此，從形態(tài)學上將噬菌體MYSP03和MYSP08歸屬于長尾科噬菌體，MYTP08歸屬于復層噬菌體科。
2.3物理及化學因素對噬菌體活性影響
2.3.1溫度對噬菌體增殖活性的影響
實驗表明(圖2)：MYSP03、MYSP08和MYTP08均可在4 20℃感染其宿主菌并于雙層平板上產生邊緣清晰、透明的噬菌斑，培養(yǎng)24h后噬菌斑直徑為2～4mm。MYSP08和MYTP08在25℃時仍可感染它們共同的宿主菌Flavobacterium sp.MYB08并產生少量子代噬菌體。6個不同溫度條件下，MYSP08和MYTP08均在l5℃時產生的子代噬菌體量達到最高，初步確定這兩株噬菌體最適增殖溫度為15℃。前期報道中，噬菌體MYSP03的最適增殖溫度為10oct。
圖1噬菌體電鏡形態(tài)及噬菌斑特征
(A)MYSP03噬茵斑；(B)MYSPO8噬茵斑；(C)MY'IT08噬茵斑；(D)MYSP03宿主茵形態(tài)；(E)MYSP03；(F)MYSP08；(G)MYrn)08；(H)MYSP08和MYTP08宿主茵形態(tài)。
圖2溫度對噬菌體增殖的影響
以相對效價P，Pn表示，Pn代表噬茵體MYSPo8和MYTP08的原始效價.P代表在不同溫度下培養(yǎng)6h后的效價。
2.3.2熱穩(wěn)定性分析
噬菌體MYSP08和MYTP08在低于4O℃的情況下非常穩(wěn)定，結果見圖3，超過40℃時，兩株噬菌體的存活率均呈直線下降趨勢。60℃處理30min，噬菌體MYTP08的’活Jl生幾乎完全喪失，而MYSP08也只有不到10％的存活率；70oC處理30min時，兩株噬菌體均完全失活，這與之前報道的噬菌體MYSP03相符3株低溫噬菌體的熱穩(wěn)定性都較差。
2.3.3 pH敏感性
由圖4可知，MYSP08在pH 5～8穩(wěn)定性較好，經處理仍有92％以上的噬菌體存活，尤其在pH 7～8時，其穩(wěn)定性幾乎不受影響。MYTP08對pH的耐受范圍為pH 3-9，在pH 5—6時穩(wěn)定性最好。噬菌體MYsP08、MYTP08和已報道的MYSP03同樣都具有較寬的pH適應范圍。
圖3噬菌體M YSP08與M YTP08熱穩(wěn)定性
以相對效價P／P0表示，P0代表噬茵體MYSP08和MYTP08的原始效價.P代表在不同溫度下處理30min后的效價。
圖4 pH對噬茵體MYSP08與M YTP08的影響
以相對效價P／Pn表示，代表噬茵體MYSP08和MYTP08的原始效價，P代表在不同pH緩沖液中處理1h后的效價。
2.3.4化學試劑敏感性
噬菌體MYSP08與MYTP08經不同化學試劑處理，穩(wěn)定性差異較大。由圖5可見：MYSP08對氯仿及非離子型去垢劑TritonX-100不敏感，經處理后存活率可達60％以上，對離子型去垢劑SDS較敏感，經終濃度為0.1％(wt／v)的SDS于5O。處理6min后只剩約10％的噬菌體存活，對蛋白酶K極其敏感，處理后幾乎全部失活，這與已報道的MYSP03結果相似，表明噬菌體對化學試劑的敏感性主要受其組成結構的影響。噬菌體MYTP08對氯仿、去垢劑及蛋白酶K均很敏感，經處理，其存活率分別只剩7.4%、8.1%、17.5%和0.8%，與MYSP03和MYSP08不同，MYTP08對氯仿敏感，表明其衣殼結構可能具有脂質包裹。
2.4噬菌體MYSP03吸附速率
噬菌體純培養(yǎng)液的初始效價為1*109pfu/mL，由吸附速率曲線可知（圖6）：當MOI為10℃，15℃溫育2 min就有近80%的MYSP03顆粒吸附到宿主細胞，MYSP08和MYTP08的被吸附數(shù)量也超過了70%。溫育6 min后，3株噬菌體被吸附的顆粒數(shù)量均高達97%，溫育10 min后，混合液中的噬菌體顆粒幾乎全部吸附到了宿主菌細胞上。因此，3株噬菌體對宿主均具有較強的吸附能力。
2.5噬菌體MYSP03最佳感染復數(shù)
不同MOI下培養(yǎng)結果見圖7。當MOI=0.1時，噬菌體MYSP03感染其宿主菌Flavobacteriumsp.MYB03所產生的子代噬菌體效價為4.42伊109pfu/mL，在6個MOI中產出最高，因此確定MYSP03與其宿主的最佳感染復數(shù)為0.1。MYSP08和MYTP08均能特異性感染宿主菌Flavobacterium sp.MYB08，但分別在MOI為10和1時產生的子代噬菌體數(shù)量最多，因此確定其最佳感染復數(shù)分別為10和1。
2.6噬菌體一步生長曲線
由3株噬菌體的一步生長曲線（圖8）可以看出，當MOI=10℃，15℃振蕩培養(yǎng)，3株噬菌體表現(xiàn)出明顯不同的潛伏期、裂解期，MYTP08尤為突出，其潛伏期約90 min，裂解期約30 min，在3株噬菌體中潛伏期最長而裂解期最短。實驗中被感染的宿主菌的初始濃度為2*107cfu/mL，根據(jù)公式：裂解量=裂解末期噬菌體效價衣感染初期宿主菌濃度，可以計算得出3株噬菌體感染其宿主菌的裂解量分別是57、71和137（表1）。
圖8 3株噬菌體一步生長曲線
以相對效價LogP，Pn表示，代表噬茵體MYSP08和MYI1Po8的原始效價.尸代表所測得培養(yǎng)體系中噬茵體的效價。
表1 3株噬菌體感染宿主的潛伏期、裂解期和裂解量
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