尼泊金丁酯，又稱對(duì)羥基苯甲酸丁酯，屬對(duì)羥基苯甲酸酯類物質(zhì)，白色結(jié)晶，微有特殊氣味，溶于醇、醚和氯仿，難溶于水，口嘗時(shí)有麻舌感。可作為有機(jī)合成中間體。尼泊金丁酯外用安全性極高，已被廣泛作為殺菌防腐添加劑應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品、膠片以及高檔產(chǎn)品領(lǐng)域。對(duì)大鼠、兔、狗、貓等的研究表明，尼泊金酯類物質(zhì)可經(jīng)胃腸道吸收，可以在體內(nèi)迅速代謝，無論是尼泊金酯類物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物均不在體內(nèi)蓄積。尼泊金酯類的急性毒性為微毒，尼泊金丁酯皮下注射的半數(shù)致死量為16g/kg。先前的研究報(bào)道，尼泊金丁酯具有一定的抗細(xì)菌活性和抗真菌活性，但活性菌均較弱，目前，尚無關(guān)于尼泊金丁酯作為抗菌增效劑的報(bào)道。
小檗堿，也叫黃連素，原是從中藥川芍中提取的生物堿，目前可在多種草本植物中提取或人工合成，化學(xué)結(jié)構(gòu)為四甲基吡嗪，已被證實(shí)具有多種生物學(xué)功能，包括抗炎、抗氧化、抗微生物、免疫調(diào)控、控制血糖、心血管保護(hù)等功能，臨床用常常用于治療腹瀉、糖尿病及心血管等疾病。小檗堿也具有明顯的抗菌活性，小檗堿對(duì)革蘭氏陰性菌的抗菌活性較弱，最小抑菌濃度常常在512μg/mL以上，而對(duì)革蘭氏陽性的抗菌活性較強(qiáng)，最小抑菌濃度在128-512μg/mL之間。
尼泊金丁酯和小檗堿聯(lián)合使用對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性試驗(yàn)
尼泊金丁酯和小檗堿聯(lián)合使用對(duì)病原菌的聯(lián)合用藥指數(shù)(FICI)測(cè)定：使用棋盤法測(cè)定尼泊金丁酯和小檗堿聯(lián)合應(yīng)用對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCC 33591、犬臨床偽中間葡萄球菌菌株31A等菌株的FICI值。具體操作如下：
抗菌藥物尼泊金丁酯(作為甲藥)和小檗堿(作為乙藥)分別以各自的2MIC為最高濃度，使用MHB肉湯培養(yǎng)基倍比稀釋成8-11個(gè)濃度，分別沿96微孔培養(yǎng)板橫軸、縱軸加入含有不同濃度兩藥的MHB肉湯培養(yǎng)基50μL，然后分別加入各種病原菌菌液50μL，使最終每孔細(xì)菌數(shù)為2×105
CFU，37℃恒溫培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。記錄兩藥分別單用和聯(lián)用時(shí)各自的MIC，按下述公式計(jì)算FICI值(部分抑菌濃度指數(shù))。
FICI＝MIC甲藥聯(lián)合/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)合/MIC乙藥單用
判斷標(biāo)準(zhǔn)：FICI≤0.5，協(xié)同作用；0.5＜FICI≤1，相加作用；1﹤FICI≤2，無關(guān)作用；FICI＞2，拮抗作用。即：尼泊金丁酯和小檗堿的FICI＝MIC(小檗堿聯(lián)合)/MIC(小檗堿單用)+MIC(尼泊金丁酯聯(lián)合)/MIC(尼泊金丁酯單用)。測(cè)定結(jié)果如表1所示：
表1尼泊金丁酯和小檗堿聯(lián)合使用對(duì)ATCC33591和犬臨床偽中間葡萄球菌菌株的抗菌作用
由表1可以看出：尼泊金丁酯和小檗堿單獨(dú)使用對(duì)MRSA33591的MIC分別為160μg/mL和1024μg/mL，二者聯(lián)合使用時(shí)的MIC分別為40μg/mL和128μg/mL，協(xié)同指數(shù)FICI為0.375。也即當(dāng)尼泊金丁酯與小檗堿的質(zhì)量比為1:3.2，兩者協(xié)同增效效果最好。
尼泊金丁酯和小檗堿單獨(dú)使用對(duì)犬臨床偽中間葡萄球菌菌株31A的MIC分別為160μg/mL和128μg/mL，二者聯(lián)合使用時(shí)的MIC分別為20μg/mL和32μg/mL，協(xié)同指數(shù)FICI為0.375。也即當(dāng)尼泊金丁酯與小檗堿的質(zhì)量比為1:1.6，兩者協(xié)同增效效果最好。
尼泊金丁酯和小檗堿單獨(dú)使用對(duì)犬臨床偽中間葡萄球菌菌株U6086的MIC分別為160μg/mL和256μg/mL，二者聯(lián)合使用時(shí)的MIC分別為40μg/mL和64μg/mL，協(xié)同指數(shù)FICI為0.375。也即當(dāng)尼泊金丁酯與小檗堿的質(zhì)量比為1:1.6，兩者協(xié)同增效效果最好。
本文通過棋盤法最小抑菌濃度試驗(yàn)、體外細(xì)菌生長(zhǎng)曲線和動(dòng)物試驗(yàn)證明尼泊金丁酯能夠顯著增強(qiáng)小檗堿的抗細(xì)菌活性和抗真菌活性，試驗(yàn)中的細(xì)菌包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、犬貓?jiān)磦沃虚g葡萄球菌；試驗(yàn)中的真菌包括白色念珠菌。本實(shí)驗(yàn)為尼泊金丁酯與小檗堿的聯(lián)合用藥開辟了一種新用途，能夠明顯提高小檗堿的抗細(xì)菌和抗真菌活性，其中，在治療多重耐藥革蘭氏陽性菌感染具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
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