肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)是本世紀引起醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染(如肺炎、敗血癥和肝膿腫)的最常見最棘手的人獸共患病原體之一。近年來，由于長期不合理使用抗菌藥物，多重耐藥(MDR)肺炎克雷伯菌的致病率逐年上升，嚴重威脅人和動物的健康。替加環(huán)素耐藥在肺炎克雷伯菌中越來越多地被觀察到并引起高度關(guān)注。tmexCD1-toprJ1是近年來從我國的雞和患者中分離的肺炎克雷伯菌中質(zhì)粒攜帶的一種新型的耐藥-結(jié)瘤-分裂(RND)型外排泵基因簇，可引起包括替加環(huán)素在內(nèi)的多藥耐藥。
抗生素佐劑策略是通過抑制細菌耐藥性或增強抗生素殺傷能力來延長現(xiàn)有抗生素壽命的具有成本效益且有前景的方法。在過去幾年中，基于替加環(huán)素與其他抗生素的聯(lián)合療法已被廣泛使用，但治療效率不令人滿意。與抗生素不同，非抗生素輔助策略可以通過增強抗生素的殺傷作用來最大化現(xiàn)有抗生素的抗菌功效，這是對抗抗生素耐藥性的有希望的方法。到目前為止，已經(jīng)報道了一些關(guān)于替加環(huán)素的非抗生素佐劑的研究。有研究表明，tmexCD1-toprJ1陽性細菌的耐替加環(huán)素機制為通過細菌膜上的外排泵將替加環(huán)素泵出，從而減少替加環(huán)素在細菌體內(nèi)的積累。因此通過抑制tmexCD1-toprJ1陽性細菌外排泵的功能，為tmexCD1-toprJ1陽性細菌感染防治和發(fā)現(xiàn)潛在先導化合物提供了新的途徑。
下面介紹駱駝蓬靈在制備tmexCD1?toprJ1介導的外排泵抑制劑中的應用，并通過生長曲線試驗驗證駱駝蓬靈能夠破壞細菌外排泵的功能，并且在體內(nèi)模型中體現(xiàn)了良好的抗tmexCD1?toprJ1陽性肺炎克雷伯菌感染效果。這為肺炎克雷伯菌感染防治提供了新的途徑和潛在先導化合物。
生長曲線測定
挑取一個K.pneumoniae T2單菌落，接種到裝有3mL LB肉湯的試管中，37℃、180rpm震蕩培養(yǎng)過夜。過夜培養(yǎng)物以1:100的比例在裝有150mL新鮮MHB肉湯的200mL錐形瓶中擴增，直至OD600nm
達到0.3。將OD600nm
值為0.3的菌液倒入三個經(jīng)過高壓滅菌和干燥的50mL小錐形瓶中，每個小瓶20mL。在小瓶中分別加入0、64μg/mL、128μg/mL的駱駝蓬靈，每隔半小時用分光光度計測量一次OD600nm
值，在37℃下記錄6小時的數(shù)據(jù)，并形成生長曲線。實驗一式三份，獨立重復。
結(jié)論：64μg/mL、128μg/mL的駱駝蓬靈分別處理K.pneumoniae T2后，對細菌的生長幾乎沒有影響，見圖。
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