本文對普遍采用的四爿藻生物量累積時期生長狀況的評價方法進行比較，旨在尋找適合于評價四爿藻生活史運動時期細胞生長狀況的準確、簡便、快捷的方法。
1、實驗
1.1材料
實驗所用藻種為3個不同種的海洋四爿藻：朱氏四爿藻(TetraselmischuiWH01)、心形四爿藻(T.cordiformisWH02)，采自山東省青島市沿海地區(qū)；大四爿藻(T.helgolandicaWH03)，采自浙江省象山縣。藻種由中科院武漢植物研究所藻種庫提供。
1.2四爿藻的培養(yǎng)
將3種四爿藻藻種接種于改良的適合于水產(chǎn)養(yǎng)殖的四爿藻培養(yǎng)基中，置于RH-150-G型恒溫光照培養(yǎng)箱中(20±2)℃下持續(xù)光照培養(yǎng)，光強2000～4000 lx，搖床轉(zhuǎn)速120 r·min-1。
1.3四爿藻的生長評價
1.3.1細胞計數(shù)
分別取待測的四爿藻培養(yǎng)物(培養(yǎng)前6 d)，用Lugol氏固定液固定，血球計數(shù)法計數(shù)。每樣品重復4次，求平均值，繪制生長曲線。
1.3.2葉綠素含量測定
采用快速微量提取法進行，略作改動。離心收獲不同生長期的四爿藻培養(yǎng)物，加入95%乙醇研磨(補足體積)后室溫下抽提4～6 h，離心取上清，乙醇重提，直至抽提充分(共抽提3次)。合并上清，用722型分光光度計檢測OD649和OD665值。根據(jù)下面公式計算葉綠素a(Chl a)、葉綠素b(Chl b)的含量(μg·mL-1)，每樣品重復4次，求平均值，繪制生長曲線并與細胞計數(shù)法繪制的生長曲線進行比較。
Chl a含量=13.7×OD665-5.76×OD649
Chl b含量=25.8×OD649-7.6×OD665
1.3.3特定光密度值測定
采用722型分光光度計直接測定四爿藻培養(yǎng)物在不同波長(560 nm、625 nm、750 nm)下的光密度值，繪制生長曲線，并與細胞計數(shù)法繪制的生長曲線進行比較。
1.3.4數(shù)據(jù)處理及分析
采用Origin v6.0作圖，分析生長曲線的差異，并對3種四爿藻據(jù)葉綠素a的平均含量繪制的生長曲線進行回歸，并與細胞計數(shù)法得到的生長曲線回歸結(jié)果進行比較。
圖1朱氏四爿藻(A)、心形四爿藻(B)、大四爿藻(C)的生長曲線(根據(jù)幾組特定光密度值繪制)
圖2朱氏四爿藻(A)、心形四爿藻(B)、大四爿藻(C)的生長曲線(根據(jù)葉綠素a、b含量繪制)
結(jié)論
通過測定3種四爿藻的細胞數(shù)目、葉綠素a和葉綠素b的含量變化及幾種波長下的特征光密度吸收值，分別繪制生長曲線。結(jié)果表明，葉綠素b含量變化和OD560、OD625、OD750變化與生長趨勢不太吻合，而葉綠素a含量變化和細胞數(shù)目變化較為一致，呈現(xiàn)較為規(guī)則的指數(shù)生長曲線。表明了利用葉綠素a含量變化可評價四爿藻生長狀況。此外，葉綠素a含量測定方法較為直接，只需取少量細胞(1 mL即可)經(jīng)過乙醇簡單抽提，再測定光密度值，方法簡便、快捷，較適合大規(guī)模海產(chǎn)養(yǎng)殖的需求。