作者：盧云石景森韓文勝卓健生
單位：盧云(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外科)；石景森韓文勝(西安醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科研究室西安710061)；卓健生(第一附屬醫(yī)院檢驗科)
關(guān)鍵詞：
西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報000238中圖分類號R446.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼D文章編號0258-0659(2000)02-0185-02
細(xì)菌與膽固醇結(jié)石間的聯(lián)系日益引起重視，通過聚合酶鏈反應(yīng)已測得膽固醇結(jié)石中86.67%有細(xì)菌DNA存在，但細(xì)菌培養(yǎng)陽性率極低，如何改進(jìn)培養(yǎng)技術(shù)，提高陽性率成為探討細(xì)菌與膽固醇結(jié)石聯(lián)系的關(guān)鍵，本實驗用微生物自動檢測鑒定儀，于細(xì)菌生長曲線對數(shù)生長期行轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，在一定程度上提高了細(xì)菌的陽性檢出率。
1材料與方法
選1997年10月～1998年4月間膽囊結(jié)石標(biāo)本，男9例，女33例，平均年齡41歲(21～6 8歲)，均為有癥狀擇期膽囊切除的患者，用硫磷鐵法證實均為以膽固醇為主混合性結(jié)石，實驗儀器BacT/Alert 120微生物檢測儀和SCEPTOR微生物鑒定儀。
無菌取膽固醇結(jié)石核心樣品，研磨制成5～10ml懸濁液，注入增菌瓶恒溫振蕩自動培養(yǎng)1～6d，底部感應(yīng)器顯示為陽性者根據(jù)其微生物生長曲線，于對數(shù)生長期取出轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)6d為陰性者視為陰性瓶取出，陽性瓶轉(zhuǎn)種培養(yǎng)8h后取出，制備108/ml標(biāo)準(zhǔn)菌懸液，取10μl放入10ml增菌管內(nèi)，轉(zhuǎn)種到SCEPTOR細(xì)菌鑒定板，厭氧培養(yǎng)48h后，直接在SCEPTOR微生物鑒定儀中確定細(xì)菌菌種(需氧菌縮短為24h)。
2結(jié)果
42例膽石核心細(xì)菌培養(yǎng)后，單獨分離到厭氧菌2例，未單獨分離到需氧菌，同時分離到厭氧及需氧菌者5例，細(xì)菌總檢出率為16.7%(7/42)，共分離到細(xì)菌12株，其中厭氧菌7株，需氧菌5株，7株厭氧菌分歸3個屬：梭菌、丙酸桿菌、厭氧性鏈球菌，其中梭菌屬4株，占厭氧菌株的57.1%。需氧菌包括大腸埃希菌3株，糞鏈球菌和腸鏈球菌各1株。
3討論
80年代我們曾用傳統(tǒng)方法行膽石核心細(xì)菌培養(yǎng)，44例膽囊結(jié)石中僅2例陽性，而本實驗采用BacT/Alert 120微生物檢測系統(tǒng)，它所提供的微生物生長曲線為直接觀察細(xì)菌生長情況，選擇恰當(dāng)時間轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，為提高陽性培養(yǎng)率提供了有效手段，在微生物生長曲線四個時期中，遲緩期陽性率低；對數(shù)生長期細(xì)菌大量繁殖，細(xì)菌反應(yīng)單位數(shù)以對數(shù)方式上升，此時培養(yǎng)陽性率最高，此期厭氧菌可維持6～24h，需氧菌僅為5～12h，在穩(wěn)定期行轉(zhuǎn)種培養(yǎng)仍可維持一定陽性率，但較前已有一定降低，而一旦進(jìn)入衰退期，多數(shù)細(xì)菌已死亡，可出現(xiàn)假陰性。本組所用Back/Alert增菌瓶中所含胰消化酪蛋白酶等化學(xué)成份，根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)配制，對各種細(xì)菌提供的增菌環(huán)境遠(yuǎn)優(yōu)于各種肉湯培養(yǎng)液。菌種鑒定中本組使用SCEPTOR微生物鑒定系統(tǒng)自動鑒定，避免各種生化鑒定條所致系統(tǒng)誤差。
本組50%以上的厭氧菌株屬梭菌屬，該屬類細(xì)菌因含芽胞，抵抗力強，能長期耐受惡劣條件，一旦條件適應(yīng)即可出芽繁殖，這也許是該細(xì)菌能存在于膽固醇結(jié)石核心的首要條件，本實驗培養(yǎng)出4株產(chǎn)氣莢膜梭菌，首次懷疑為研磨污染所致，二次將研磨環(huán)氧乙烷消毒后增菌培養(yǎng)，出現(xiàn)同樣結(jié)果。說明有可重復(fù)性。該菌非嚴(yán)重厭氧，生長繁殖的溫度較廣，37℃時分裂繁殖周期僅8min，常超過其它混合感染細(xì)菌而占主導(dǎo)地位，更重要的是它可產(chǎn)生10余種外毒素，其中α毒素具有活性卵磷脂酶能消耗底物卵磷脂，使其減少，這也許是產(chǎn)氣莢膜梭菌成為膽固醇結(jié)石核心的關(guān)鍵。
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